PDF《东莞市谱标实验器材科技有限公司》

东莞市谱标实验器材科技有限公司东莞市松山湖大学创新城 G-1 栋2层服务热线:400

800 3875 色谱柱使用寿命延长的方法 色谱柱的使用寿命,除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外,最主要的是与日常 的维护有着密切相关.

色谱柱的使用寿命主要是柱效和柱压两个指标来衡量,如果一支色谱柱柱效太低或柱压 太高,通常被认为该色谱柱已经结束.因此,延长色谱柱使用寿命的关键是消除引起柱效下降 和柱压升高的因素. 以下五点是色谱柱的日常维护方法:

一、流动相的 PH 应在使用的范围内;

色谱柱除反相氰基柱 PH1.5-9.0 外,其反相色谱柱的 PH 范围均为 1.5-10,由于填料中存 在Si-C 和Si-O 键,流动相超过其 PH 范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效 下降,使用寿命变短.由于流动相的 PH 控制不当而对色谱柱造成的损害,通常很难使色谱柱 恢复,因此必须认真对待,严格控制流动相的 PH 值.

二、去除样品和流动相中的固体颗粒;

样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,筛板被堵住不仅会引起柱压的升 高, 而且也会引起柱效下降,因为筛板的堵塞会引起液流不均,导致色谱峰型拖尾、变宽,从而 使柱效下降.因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析样品前对样品进行针筒过滤,流动 相过 0.45μm 滤膜.

三、使用保护柱或在线过滤器;

样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质,因为泵的磨损、密封圈和管路的老化 也会产生固体颗粒物质,这些固体颗粒被流动相带入色谱柱,堵塞筛板,导致柱压升 东莞市谱标实验器材科技有限公司东莞市松山湖大学创新城 G-1 栋2层服务热线:400

800 3875 高、柱效下降.保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱孔径相同,因此可以阻止固 体颗粒物质到达色谱柱, 有效防止色谱柱筛板的堵塞.由于柱压升高在分析故障中占很大比例, 因此,除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器.

四、正确使用缓冲盐 缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会使其析出,堵塞填 料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;

同时阻碍了基质上键合的碳链自由 舒展,使色谱柱的保留能力下降,柱效降低.缓冲盐析出后,去除非常困难,因此,正确的使 用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要. 正确使用缓冲液的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话:使用 前要过滤,使用后要冲洗.具体方法如下:

1、等度条件:使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以 1.0ml/min 流速冲洗 60min;

使用 后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以 0.2ml/min 流速冲洗色谱柱过夜.

2、梯度条件 : 用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以 1. 0ml/min 流速冲洗 60min,再用该过渡流动相以 1.0ml/min 冲洗色谱柱 120min.含缓冲盐 流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出.

3、缓冲盐析出的补救方法: 方案 1:用甲醇/20/80 以1.0ml/min 流速

35 摄氏度条件下反向冲洗色谱柱 120min 方案 2:用甲醇/水=20/80 以0.2ml/min 流速反向冲洗色谱柱过夜.

五、防止强保留物质在色谱柱上存留 强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积,对样品中的化合物产生额外的保留行为,不仅 东莞市谱标实验器材科技有限公司 东莞市松山湖大学创新城 G-1 栋2层服务热线:400