PDF《袁苑子午流注纳甲法对局灶性脑缺血模型大鼠 大脑皮质 孕悦...》

收稿日期院圆园员圆 原 园源 原 员园 基金项目院甘肃省财政厅基本科研业务费专项资金渊圆园员园 原 远冤 作者简介院何应学渊员怨苑远 原 冤袁男袁助理研究员遥 研究方向院针灸传统针法的基础研究遥 通讯作者院王亚军渊员怨远猿 原 冤袁男袁副教授袁医学博士遥 研究方向院针灸传统针法的研究遥 耘鄄皂葬蚤造院贼葬灶早灶蚤葬燥圆园园愿岳 员圆远援 糟燥皂 子午流注纳甲法对局灶性脑缺血模型大鼠 大脑皮质 孕悦晕粤 表达的影响 何应学袁王亚军袁方晓丽袁黄春换 渊甘肃中医学院袁甘肃 兰州 苑猿园园园园冤 摘摇 要院目的摇 观察子午流注纳甲法对局灶性脑缺血模型大鼠神经干细胞增殖的影响袁探讨其治疗缺血 性脑血管疾病的机制遥 方法 将 员源源 只 杂孕云 级 杂阅 雄性大鼠随机分为正常组尧假手术组尧模型组尧常规针刺 组尧纳甲组和常规针刺 垣 纳甲法组渊简称联合组冤远 大组袁每组再随机分为术后 远 澡袁猿 凿袁苑 凿猿个时间段亚组袁 共 员愿 组袁每组 愿 只遥 采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型袁分别通过常规针刺尧子午流注纳甲法及 常规针刺联合子午流注纳甲法治疗后袁在造模后 远 澡袁猿 凿袁苑 凿 取脑制作切片袁免疫组化法测定大鼠缺血侧大 脑皮质增殖细胞核抗原渊孕悦晕粤冤的表达遥 结果 同时段正常组与假手术组大鼠大脑皮质 孕悦晕粤 的表达差异 无统计意义渊孕 跃 园援 园缘冤曰与正常组比较袁同时段模型组 孕悦晕粤 的表达显著增加渊孕 约 园援 园缘冤曰与模型组比较袁同 时段各治疗组 孕悦晕粤 的表达均显著增加渊孕 约 园援 园缘 或孕约园援 园员冤袁且纳甲组和联合组的作用显著优于常规针 刺组渊孕 约 园援 园缘 或孕约园援 园员冤曰同时段纳甲组和联合组 孕悦晕粤 的表达差异无统计意义渊孕 跃 园援 园缘冤遥 正常组尧假 手术组和常规针刺组不同时段 孕悦晕粤 表达差异无统计意义渊孕 跃 园援 园缘冤曰模型组 猿凿时孕悦晕粤 的表达显著高于 远澡及苑凿渊孕 约 园援 园员冤袁远 澡及苑凿时孕悦晕粤 的表达差异无统计意义渊孕 跃 园援 园缘冤曰与 远澡比较袁纳甲组和联合组 猿 凿时 孕悦晕粤 的表达显著增强渊孕 约 园援 园缘冤袁苑 凿时孕悦晕粤 的表达显著减弱渊孕 约 园援 园缘冤袁与 猿凿时比较袁圆 组苑凿时孕悦晕粤 的表达减弱更加显著渊孕 约 园援 园员冤遥 结论 子午流注纳甲法可促进局灶性脑缺血模型大鼠大脑皮质 孕悦晕粤 的表达袁提示其能促进脑缺血后神经干细胞的增殖袁促进神经细胞的代偿性修复袁这可能是针刺治疗 缺血性脑中风的重要作用机制之一遥 关键词院子午流注纳甲法曰脑缺血曰神经干细胞曰增殖细胞核抗原 中图分类号院砸圆源缘援 猿摇 文献标识码院月摇 文章编号院员园园猿 原 愿源缘园渊圆园员圆冤园源 原 园园园缘 原 园源 摇摇缺血性脑血管疾病属于中医中风渊又称卒中冤 范畴袁是针灸治疗的有效病症之一遥 但何种方法最 有效袁其对缺血性脑损伤的保护尧修复作用以及内在 的调节机制一直是研究的重点遥 子午流注针法是按 照人体气血虚衰的周期性袁从而应对自然界变化袁采 取逐日按时开穴的针灸治疗方法袁能够起到调和气 血尧补虚泻实尧平衡阴阳的作用遥 既往对子午流注针 法的研究主要集中在临床研究上袁实验研究渊动物 实验冤较少遥 本课题从神经干细胞的角度袁比较子 午流注纳甲法在治疗缺血性脑血管病中与常规针刺 法的作用差异袁进而探讨其治疗缺血性脑血管病的 机制袁为临床治疗提供实验依据遥 员摇 实验材料 员援 员摇 实验动物 杂孕云 级 杂阅 雄性大鼠 员源源 只袁体质量渊圆园园 依 圆园冤早袁 由甘肃中医学院实验动物中心提供袁 许可证号院 杂悦载运渊甘冤圆园员员 原 园园园员遥 普通颗粒大鼠饲料喂养袁自 由饮水袁光暗周期 员圆 澡袁适应环境 员 周后开始实验遥 员援 圆摇 主要试剂与仪器 鼠抗增殖细胞核抗原 渊 孕悦晕粤冤 单克隆抗 体尧 杂粤月悦 免疫组化染色试剂盒袁均由武汉博士德生物 工程有限公司提供遥 阅宰 原 愿远蕴愿圆愿 型超低温冰箱袁 中国 海尔公司曰 月载远园 型光学照相显微镜袁 日本韵造赠皂责怎泽公司曰月陨 原 圆园园园 数码医学图像分析系统袁成 都泰盟科技有限公司曰猿园 号华佗牌 员 寸美容针灸 针袁苏州针灸器械厂遥 圆摇 实验方法 圆援 员摇 动物分组 将 员源源 只大鼠采用随机数字表法分为正常组尧假 手术组尧模型组尧常规针刺组尧纳甲组和常规针刺 垣纳甲法组渊简称联合组冤远 大组袁每组再随机分为术后 远 澡袁猿 凿袁苑 凿猿个时间段亚组袁共 员愿 组袁每组 愿 只遥 要缘要第圆怨 卷第源期圆园员圆 年愿月摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇甘肃中医学院学报允郾 郧粤晕杂哉 悦韵蕴蕴耘郧耘 韵云 栽悦酝 摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇灾燥造郾 圆怨摇 晕燥郾 源 粤怎早援 圆园员圆 圆援 圆摇 造模 参考 在藻葬 蕴燥灶早葬 方法袁用大脑中动脉线拴法制 备大鼠局灶性脑缺血模型遥 除正常组及假手术组 外袁其余大鼠均选择右侧大脑中动脉渊酝悦粤冤区作为 梗死侧袁用 员园豫 水合氯醛 猿园园 皂早 辕 噪早 腹腔麻醉袁仰卧 位固定于鼠板上袁在颈部正中作长约 圆 糟皂 的纵行切 口袁顿性剥离皮下筋膜尧肌肉袁充分暴露右侧颈总动 脉渊悦悦粤冤及分支颈内动脉渊陨悦粤冤尧颈外动脉渊耘悦粤冤袁 游离颈总动脉袁分别在 悦悦粤 近心端尧耘悦粤 及 悦悦粤 远 心端挂线备用袁用微动脉夹暂时夹闭 陨悦粤袁然后近心 端结扎 悦悦粤袁耘悦粤遥 在 悦悦粤 上距分叉部 源 皂皂 处剪 一小口袁将栓线插入至 陨悦粤袁扎紧 悦悦粤 远心端的线 以固定栓线袁松开动脉夹袁直至遇到少许阻力为止袁 从 悦悦粤 分叉部起插入深度约为 员愿 耀 员怨 皂皂袁缝合皮 肤袁单笼饲养观察遥 假手术组仅分离右侧颈总动脉尧 陨悦粤 及 耘悦粤遥 成模后大鼠单笼饲养袁自由进食尧水遥 术后大鼠生命体征稳定后袁按 蕴燥灶早葬 法进行神经功 能评分遥 园 分院无神经系统损害症状遥 员 分院不能完 全伸直左前爪遥 圆 分院向左侧转圈遥 猿 分院行走时向 左侧倾斜遥 源 分院不能自发行走袁意识丧失遥 评分为 员耀猿分则造模成功袁用于实验遥 圆援 猿摇 治疗方法 对于治疗时间袁从近年来有关针刺治疗中风的 实验研究来看袁均在大鼠缺血造模成功后当天开始 针刺治疗咱员 原 源暂 遥 本实验各组均于术后渊约 员 澡冤大鼠 清醒即开始治疗袁每日同一时间治疗 员 次袁分别在术 后远澡袁猿 凿袁苑 凿 时处死大鼠取材遥 穴位定位参照华 兴邦咱缘暂 制定的常 用动物 腧穴图谱 或叶实验 针灸学曳咱远暂 类比取穴袁针刺深度以穴位而定袁采用平补平 泻法袁每次留针 圆园 皂蚤灶遥 正常组尧假手术组和模型组 每日只进行相同抓取袁同期同步饲养袁不作其他任何 治疗遥 常规针刺组选取百会渊顶骨正中冤袁向后斜刺 圆 皂皂曰合谷渊前肢第一和第二掌骨之间冤袁直刺袁深度 员 皂皂曰三阴交渊后肢内踝尖直上 员园 皂皂冤袁直刺袁深度 缘 皂皂袁留针 圆园 皂蚤灶袁每日 员 次遥 纳甲组根据郑魁山 叶子午流注与灵龟八法曳咱苑暂 所记载的徐凤野子午流注 纳甲法逐日按时开穴法冶袁依野 阳日阳时开阳经之 穴袁阴日阴时开阴经之穴冶的原则袁于每日辰时或巳 时纳甲法按时开穴针刺治疗袁留针 圆园 皂蚤灶袁每日 员 次遥 联合组以常规针刺联合子午流注纳甲法治疗遥 圆援 源摇 标本制作 分别在术后 远 澡袁猿 凿袁苑 凿 时袁将大鼠经常规灌注 固定后进行取材遥 将固定后的脑组织在常温下用酒 精由低浓度向高浓度梯度脱水袁二甲苯透明袁浸蜡袁 石蜡包埋袁在切片机上切片袁片厚 缘 滋皂袁匀耘 染色遥 圆援 缘摇 指标检测及图像分析 采用免疫组化法检测 孕悦晕粤袁具体步骤按 杂粤月悦 试剂盒说明书进行遥 在显微镜下观察免疫组化染色 结果袁并照相遥 孕悦晕粤 以细胞核呈现棕黄色为阳性 表达袁每张切片在缺血侧皮质随机选取 猿 个位置临 近的视野袁拍照袁采用 月陨 原 圆园园园 数码医学图像分析 系统进行分析袁测量每个视野内阳性表达积分光密 度渊韵阅冤袁取其平均值遥 圆援 远摇 统计学处理 运用 杂孕杂杂员苑援 园 统计软件处理数据袁数据以 曾依泽表示袁采用单因素方差分析袁孕 约 园援 园缘 表示差异有统 计意义遥 猿摇 结果 猿援 员 同时段各组大鼠大脑皮质 孕悦晕粤 的表达比较 结果见表 员遥 同时段正常组与假手术组大鼠大 脑皮质 孕悦晕粤 的表达差异无统计意义渊孕 跃 园援 园缘冤曰 与正常组比较袁同时段模型组 孕悦晕粤 的表达显著增 加渊孕 约 园援 园缘冤曰与模型组比较袁同时段各治疗组 孕悦鄄 晕粤 的表达均显著增加渊孕 约 园援 园缘 或孕约园援 园员冤袁且纳 甲组和联合组的作用显著优于常规针刺组 渊孕约园援 园缘或 孕约园援 园员冤曰同时段纳甲组和联合组 孕悦晕粤 的 表达差异无统计意义渊孕 跃 园援 园缘冤遥 表员同时段各组大鼠大脑皮质 孕悦晕粤 的表达比较 渊 曾依泽袁灶 越愿冤 组别 远澡猿凿苑凿正常组 园援 圆愿远 依 园援 园园苑 园援 圆愿苑 依 园援 园员源 园援 圆愿园 依 园援 园员苑 假手术组 园援 圆怨怨 依 园援 园员员 园援 猿园源 依 园援 园员缘 园援 圆怨怨 依 园援 园员缘 模型组 园援 猿圆圆 依 园援 园员员鄢 园援 猿缘猿 依 园援 园员愿鄢 园援 猿圆缘 依 园援 园员员鄢 常规针刺组 园援 猿缘远 依 园援 园猿远吟 园援 猿苑愿 依 园援 园圆怨吟 园援 猿缘猿 依 园援 园员苑吟 纳甲组 园援 源员猿 依 园援 园员远吟吟银银 园援 源源苑 依 园援 园圆愿吟吟银银 园援 猿愿园 依 园援 园猿员吟吟银 联合组 园援 源圆员 依 园援 园圆猿吟吟银银 园援 源缘源 依 园援 园圆怨吟吟银银 园援 猿愿愿 依 园援 园猿远吟吟银 摇摇摇注院与同时段正常组比较鄢孕 园援 园缘曰与同时段模型组比较吟孕 园援 园缘袁吟吟孕 园援 园员曰与同时段常规针刺组比较 摇 银孕 园援 园缘袁银银孕 园援 园员遥 要远要第圆怨 卷第源期圆园员圆 年愿月摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇甘肃中医学院学报允郾 郧粤晕杂哉 悦韵蕴蕴耘郧耘 韵云 栽悦酝 摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇灾燥造郾 圆怨摇 晕燥郾 源 粤怎早援 圆园员圆 猿援 圆 同组不同时段大鼠大脑皮质 孕悦晕粤 的表达比 较 结果见表 圆遥 正常组尧假手术组和常规针刺组 不同时段 孕悦晕粤 表达差异无统计意义渊孕 跃 园援 园缘冤曰 模型组 猿凿时孕悦晕粤 的表达显著高于 远澡及苑凿渊孕 约 园援 园员冤袁远 澡及苑凿时孕悦晕粤 的表达差异无统计 意义渊孕 跃 园援 园缘冤曰与 远澡比较袁纳甲组和联合组 猿凿时孕悦晕粤 的表达显著增强渊孕 约 园援 园缘冤袁苑 凿时孕悦晕粤 的表达显著减弱渊孕 约 园援 园缘冤袁与 猿凿比较袁圆 组苑凿时孕悦晕粤 的表达减弱更加显著渊孕 约 园援 园员冤遥 表圆同组不同时段大鼠大脑皮质 孕悦晕粤 表达比较渊 曾依泽袁灶 越愿冤 组别 远澡猿凿苑凿正常组 园援 圆愿远 依 园援 园园苑 园援 圆愿苑 依 园援 园员源 园援 圆愿园 依 园援 园员苑 假手术组 园援 圆怨怨 依 园援 园员员 园援 猿园源 依 园援 园员缘 园援 圆怨怨 依 园援 园员缘 模型组 园援 猿圆圆 依 园援 园员员 园援 猿缘猿 依 园援 园员愿鄢鄢 园援 猿圆缘 依 园援 园员员吟吟 常规针刺组 园援 猿缘远 依 园援 园猿远 园援 猿苑愿 依 园援 园圆怨 园援 猿缘猿 依 园援 园员苑 纳甲组 园援 源员猿 依 园援 园员远 园援 源源苑 依 园援 园圆愿鄢 园援 猿愿园 依 园援 园猿员鄢吟吟 联合组 园援 源圆员 依 园援 园圆猿 园援 源缘源 依 园援 园圆怨鄢 园援 猿愿愿 依 园援 园猿远鄢吟吟 摇摇摇注院与同组 远澡比较鄢孕 园援 园缘袁鄢鄢孕 园援 园员曰与同组 猿凿比较吟吟孕 园援 园员遥 源摇 讨论 孕悦晕粤 又称周期蛋白或修复蛋白袁研究表明袁 孕悦晕粤 主要表达于增殖细胞的 杂 期尧郧员 期和 郧圆 初 期袁是一种仅在增殖细胞中合成或表达的核内多肽袁 其表达和合成与细胞周期有关袁属于种系发生中高 度保守的 阅晕粤 多聚酶的辅助蛋白袁是参加 阅晕粤 合 成的一个必须因子咱愿暂 遥 孕悦晕粤 表达的产物定位于细 胞核袁 在细胞周期中袁 其表达水平的波动幅度与 阅晕粤 合成的时相变化相一致咱怨暂 袁故它可直接反映出 细胞的增殖状态遥 在 孕悦晕粤 与脑缺血关系的研究 中袁发现 孕悦晕粤 与受损神经元的 阅晕粤 修复相关遥 雷 丽丽等咱员园暂 研究整理了国内外研究增殖细胞核抗原 和脑缺血损伤的文献袁大量研究表明袁在局灶性脑缺 血再灌注过程中袁孕悦晕粤 参与了脑缺血后神经细胞 阅晕粤 损伤的修复过程袁孕悦晕粤 的变化可以影响 阅晕粤 损伤的修复过程袁对受损 阅晕粤 修复的成败决定了缺 血区神经元将来的命运遥 子午流注纳甲法作为针灸学中一种具有独特理 论体系的治疗方法袁千百年来已被临床广泛应用袁并 在实践中不断发展和完善遥 其对脑缺血的治疗作用 已通过大量临床研究得到了验证遥 本实验结果表 明袁模型组大鼠大脑皮质 孕悦晕粤 的表达显著高于正 常组袁说明脑缺血可诱使脑内源性神经干细胞增殖遥 与模型组比较袁常规针刺组尧纳甲组和联合组均可使 大脑皮质 孕悦晕粤 的表达显著增加袁说明针刺可促进 脑内源性神经干细胞增殖遥 纳甲组和联合组 孕悦晕粤 的表达显著高于常规针刺组袁纳甲组和联合组作用 相当袁提示子午流注纳甲法对促进脑内源性神经干 细胞的增殖优势明显袁优于单纯针刺法袁且提示增加 孕悦晕粤 的表达是针刺以及子午流注纳甲法取得较好 疗效的机制之一遥 本实验同组不同时段比较结果显示袁脑缺血后 孕悦晕粤 表达表现为先增强后减弱的趋势袁提示脑缺 血后早期脑细胞自我修复明显袁随着时间的推移袁脑 损伤进一步加重袁使脑细胞自我修复功能减弱袁或者 说脑细胞自我修复主要在早期发生遥 纳甲组尧联合 组猿凿时孕悦晕粤 的表达显著高于 远 澡袁苑 凿 时的表达 显著低于 猿凿及远澡袁说明纳甲组和联合组在缺血早 期的脑保护作用明显袁从而提示临床中针刺治疗缺 血性脑病时袁应及早介入袁在针刺方法上应用子午流 注纳甲法可提高疗效遥 目前多数针灸临床工作者也 认为针刺治疗缺血性脑病的介入时机越早越好袁病 程越短疗效越高咱员员暂 遥 参考文献院 咱员暂卢岩援 电针对急慢性期 酝悦粤韵 大鼠海马神经元 月糟造鄄圆 和 月葬曾 表达影响的比较咱允暂援 山东中医药大学学报袁圆园园愿袁猿圆 渊远冤院源愿怨 原 源怨圆援 咱圆暂周飞袁李福凤袁程介士袁等援 电针对急性脑缺血大鼠局部 脑血流和.

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