PDF《串联重复序列及其进化意义3》

8 ] Λ最近, 我们发现分布在长江水系的国家 一级保护珍稀水生动物中华鲟(A cip enser sinensis)、 达氏鲟 (A . dabry anus) 和白鲟 (P sep hu rus g lad ius) 以及分布在黑龙江水域的史氏鲟 (A . sch renck ii) 的mtDNA 有类似的重复序列存在, 并由此造成了个 体内的m tDNA 长度异质性和个体间的长度多态现 象Λ

1 材料与方法

111 材料 中华鲟、 达氏鲟、 白鲟和史氏鲟分别来源于湖北 宜昌、 重庆市万县、 四川宜宾和黑龙江水域Λ 组织样 本于低温条件下或用 95% 酒精保存运回实验室Λ

112 总DNA 的提纯、 PCR 反应体系及 PCR 引物 序列 DNA 的提纯和 PCR 反应体系按张四明等方法 进行[9 ] Λ PCR 引物序列如下: 正链引物L

12925 (5′

2 TCAAA GCT TA CA CCA GTCTTGTAA CC23′ ) [10 ] , 正链引物DL ( 5′ 2CAA GAA CA CAA GA TTAA TGA G2 3′ ) (本文作者设计) , 副链引物 H

740 (5′

2 GA TCAA GGTA TGTCGA TGA CA 23′ ) [2 ] Λ 引物位 置如 F ig.

1 所示Λ Fig.

1 Schem atic diagram of location of the PCR p ri m ers in m itochondrial control region

113 D NA 序列测定 纯化后的 PCR 产物在AB I377 型全自动DNA 序列仪上进行序列分析Λ

2 结果和讨论

211 中华鲟重复序列存在及由此引起个体内导质 性的证明 本研究所用引物L

12925 是位于m tDNA 细胞 色素 b 基因和控制区之间的 tRNA 基因的通用引 物, 该引物被证明在包括鱼类在内的许多动物类群 均有效[10 ] Λ引物H

740 是位于控制区的引物, 该引物 在中华鲟大样本群体遗传分析(没发表资料) 和高首 鲟(A . transm ontanus) 群体遗传研究[2 ] 中均有效, 同 时也适合达氏鲟、 史氏鲟和白鲟Λ F ig. 2a 是由这对 PCR 引物(L

15925 和H 740) 在中华鲟m tDNA 上扩 增出的DNA 带型, 一尾中华鲟个体出现多条DNA 带Λ 如果用另一对引物DL 和H740 配合扩增不包 括重复序列区的控制区序列时, 扩增的DNA 带仅 为一条DNA 带(F ig. 2b) Λ由此, 确切地证明了中华 鲟在m tDNA 控制区存在重复序列, 重复序列位于 D 2loop 左边的位置Λ 不同数目的重复序列单元造成 了同一个体存在多种不同m tDNA 分子大小的异性 现象Λ 在电泳带上表现为一个个体出现多条DNA 带(见Fig. 2a) Λ Fig.

2 Electrophoretic patterns generated by PCR in m itochondrial control region in different individuals (a) PCR p roducts generated by p ri m er L

15925 and H740 (b) PCR p roducts generated by p ri m er DL and H740 Each lane show s the PCR p roducts from one individual . M is m arker DNA

212 中华鲟及相关种类的重复序列的核苷酸序列 在用 PCR 技术充分地证明了中华鲟重复序列 存在的基础上, 进一步对中华鲟不同类型的重复序 列单元: 如不同个体重复序列单元间差异, 同一个体 不同m tDNA 分子的重复序列单元间差异的核苷酸 序列进行了分析Λ 同时还初探了我国其它几种鲟鱼 类有无类似的结构存在, 以及他们的差异如何, 测得 的序列结果列如 F ig. 3Λ 由Fig.

3 可以看出中华鲟重复序列长为

82 bpΛ 重复DNA 序列分析可以初步得到如下规律: 1) 以中华鲟样本

07 和09 号(除09-

4 外) 的结 果可以看出, 同一类型m tDNA 分子不同串联重复 序列单元间保守, 无变异发生Λ

9 5

4 第4期张四明等: 中华鲟(A cip enser sinensis) 及相关种类的m tDNA 控制区串联重复序列及其进化意义 Fig.

3 N ucleotide sequences of different types of repeats a, b, c and d rep resent Chinese sturgeon, Yangtze sturgeon, Am ur sturgeon and Chinese paddlefishes. The num bers behind letter are num ber of samp les, The num ber in parentheses and the num ber behind the dash rep resent the different tandem repeats in sam e m tDNA molecular, w hich are in order from left to right 2) 中华鲟不同个体的串联重复序列有较小的变 异, 如第