PDF《黄芪、水蛭及其配方含药血清对脂多糖诱导增生的大鼠》

实验研究78

2019 年总第

51 卷第

5 期 系膜增生性肾小球肾炎 (mesangial? proliferative glomerulonephritis, MsPGN)是我国小儿慢性肾炎中 常见的病理类型.

现代医学大多从减少细胞外基质 环境中的促细胞生长因子刺激, 抑制细胞周期性进 展和阻遏从胞膜到胞核的促使生长信号传导途径三 个主要环节入手治疗.核转录因子 (NF-κB)是应 激与炎性反应的中枢调节物.有研究发现, 肝细胞 生长因子通过阻断NF-κB信号通路途径而发挥抗肾 脏炎症的作用, 提示NF-κB活性可能与肾炎的发生 发展相关[1] .而从不同环节寻找药物用于治疗和预 防与NF-κB有关的疾病, 已成为时下热点研究方向. 金属蛋白酶组织抑制剂 (MMPs)是肾脏内主要的基 质降解酶体系, 其活性高低直接影响肾小球内细胞 外基质 (ECM)的表达量与局部沉积, 对ECM有广泛 的降解作用.其中MMP-2可通过降解Ⅳ型胶原等基 膜样基质而抑制肾小球内ECM的局部沉积.中医治 疗MsPGN以 "益气化瘀" 为治疗原则, 疗效显著.黄芪、 水蛭分别为益气、 化瘀代表药物.黄芪参与肾 脏机体的多种代谢, 具有免疫增强和免疫抑制双向 调节作用, 能抑制系膜细胞增殖.大量药物成分提 取分析研究证实, 黄芪富含的微量元素硒能加强某 些自由基清除剂的抗氧化作用, 进而推断黄芪能抑 制肾性蛋白尿[2-3] .也有研究表明, 水蛭素可以缓解 与凝血功能障碍相关的肾脏局部炎性反应导致的 肾组织损伤[4] , 达到抑制肾病进展的目的.本实验 通过检测黄芪、 水蛭及其配方含药血清对脂多糖诱 导增生的大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)中NF-κB、 MMP-2? mRNA表达的影响, 探索益气、 化瘀中药延 缓肾小球纤维化进程的可能作用机制.

1 实验材料 1.1? 实验动物及细胞? 正常雄性SD大鼠, 清洁级, 2~3月龄, 体重180~200g, 由浙江省实验动物中心 提供, 许可证号: SCXK(浙)20080033, 在南京中医药大学动物饲养室完成动物饲养.大鼠GMCs (HEBH) : 由徐州医学院实验室馈赠, 保存于武汉大 学中国典型培养物保藏中心(CCTCC) . 1.2? 药物与试剂? 黄芪、 炙水蛭(滑石粉炒制) , 南京海昌药业提供.黄芪加

10 倍水浸泡 1h, 煮沸30min后再煎 1h, 纱布过滤, 二煎加水

8 倍, 煮 沸后再煎 1h, 纱布过滤, 两煎相合, 水浴浓缩煎成 黄芪、水蛭及其配方含药血清对脂多糖诱导增生的大鼠 GMCs 中NF-κB? p

65、MMP-2 mRNA 表达的影响 顾叶云 1,

2 赵宝玲 1,

2 徐蕾1,

2 任现志 1,

2 (1.江苏省中医院, 江苏南京210029 ;

2.南京中医药大学中医儿科学研究所, 江苏南京210023) 摘要目的: 观察黄芪、 水蛭及其配方含药血清对脂多糖 (LPS)诱导增生大鼠肾小球系膜细胞 (GMCs)表达核转录 因子?p65(NF-κB?p65) 、 金属蛋白酶组织抑制剂-2(MMP-2) 的影响, 探索益气化瘀药物及其配方含药血清治疗系膜增生 性肾小球肾炎的可能机制.方法: LPS诱导大鼠GMCs(HBEH)增殖, 分别采用黄芪高剂量血清、 水蛭高剂量血清、 黄芪高 剂量水蛭高剂量血清、 黄芪低剂量水蛭高剂量血清进行干预, 24h后收集细胞, 用CCK-8法观察含药血清对GMCs增殖的影 响, Real?time?PCR法测定?NF-κB?p

65、 MMP-2因子的表达变化.结果: LPS诱导系膜细胞增殖后, NF-κB?p65mRNA表达较 正常组明显升高 (P