PDF《ISPM 27 号标准 限定有害生物诊断规程》

本诊断规程于

2015 年1月由标准委代表植检委通过.

本诊断规程

2016 年经修订. 本附件是 ISPM

27 号标准规定的一部分 《国际植物保护公约》 DP 7-1 ISPM

27 号标准 限定有害生物诊断规程 DP 7:马铃薯纺锤形块茎类病毒 (spindle tuber viroid)

2016 年通过;

2017 年出版 目录 1. 有害生物信息

3 2. 分类信息.4 3. 检测.4 3.1 抽样

7 3.2 生物学检测

7 3.3 分子检测

8 3.3.1 样品制备

8 3.3.2 核酸提取

9 3.3.3 马铃薯纺锤形块茎类病毒属的通用分子检测方法.11 3.3.3.1 R-PAGE

11 3.3.3.2 用DIG 标记的 cRNA 探针杂交.11 3.3.3.3 使用 Verhoeven 等(2004)引物的常规 RT-PCR.12 3.3.3.4 使用 GenPospi 检测的实时 RT-PCR(Botermans 等,2013)13 3.3.4 具有较高特异性的 PSTVd 分子检测方法.15 3.3.4.1 使用 Shamloul 等(1997)引物的常规 RT-PCR.15 3.3.4.2 使用 Boonham 等(2004)引物的实时 RT-PCR.15 3.3.4.3 实时 RT-PCR(Plant Print Diagnòstics 试剂盒)16 3.4 分子检测的对照.17 3.5 常规和实时 RT-PCR 结果的解释

19 3.5.1 常规 RT-PCR

19 3.5.2 实时 RT-PCR

19 4. 鉴定.19 4.1 测序与序列分析.20 5. 记录.21 DP

7 限定有害生物诊断规程 DP 7-2 《国际植物保护公约》 6. 获取进一步信息的联系点.21 7. 致谢.22 8. 参考文献.22 限定有害生物诊断规程 DP

7 《国际植物保护公约》 DP 7-3 1. 有害生物信息 类病毒是没有蛋白质外壳,共价闭合的单链环状 RNA 分子,长度为 239-401 个核苷酸,由寄主酶复制(Hammond &

Owens,2006) .马铃薯纺锤形块茎类病毒 (PSTVd;

马铃薯纺锤形块茎类病毒属(Pospiviroid) )通常长

359 个核苷酸,但有 报道称有的 PSTVd 分离物含有 341-364 个核苷酸(Wassenegger 等,1994;

Shamloul 等,1997;

Jeffries,1998) .根据易感病的番茄品种产生的症状,例如番 茄(Solanum lycopersicum L.)的卢特格(Rutgers)品种(Fernow,1967) ,人们对 其弱株系和强株系进行了描述. PSTVd 的自然寄主范围相对较窄.主要的自然寄主是产生匍匐茎和块茎的茄属 植物;

例如马铃薯(Solanum tuberosumL.)和番茄(S. lycopersicum) .PSTVd 在辣 椒(Capsicum annuum) 、鳄梨(Persea americana)和南美香瓜茄(S. muricatum) 中也有发现.PSTVd 主要在无性繁殖的茄科观赏植物种类中发现-即木曼陀罗属 (Brugmansia spp.) 、夜香树属(Cestrum spp.) 、曼陀罗属(Datura sp.) 、蓝花茄 (Lycianthes rantonetti) 、矮牵牛属(Petunia spp.) 、灯笼果(Physalis peruviana) 、 茄属(Solanum spp.)和果酱木(Streptosolen jamesonii) ,也见于菊科(Asteraceae) 的菊属(Chrysanthemum sp.)和大丽花(Dahlia * hybrida) (有关自然寄主的详细 情况,见CABI(n.d.) ) .PSTVd 的实验寄主范围很宽,包含茄科的各个种,以及至 少其他

9 个科的部分种.多数寄主很少表现或不表现病害症状(Singh,1973;

Singh 等,2003) . 已发现 PSTVd 在非洲、亚洲、东欧、北美洲(EPPO/CABI,1997) 、中美洲 (Badilla 等,1999) 、南美洲和中东(Hadidi等,2003)一些国家侵染马铃薯.然而, 它在观赏植物和其他寄主植物上有更广泛的地理分布(地理分布见 CABI (n.d.) ) . 在马铃薯中,PSTVd 的主要传播方式是无性繁殖.它也通过接触传播,主要是 田间机械和种薯块茎切分(Hammond &

Owens,2006) .PSTVd 可以通过真正的马 铃薯种子传播-多达 100%的种子可被侵染(Fernow 等,1970;

Singh,1970)-也 可以通过花粉传播(Grasmick &

Slack,1985;

Singh 等,1992) .De Bokx 和Pirone (1981)报道马铃薯长管蚜(Macrosiphum euphorbiae)低比率传播 PSTVd,但桃 蚜(Myzus persicae)和茄沟无网蚜(Aulacorthum solani)不能传播.然而,有报道 称,实验条件下桃蚜可从受PSTVd 和马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus (PLRV) )联合侵染的植株中获得并传播 PSTVd(Salazar 等,1995;