PDF《中的作用》

31(2) ・ ・

256 实验中心提供, 培养于含 10% FBS 的RPMI

1640 培 养基中, 于含5% CO

2、 饱和湿度和37 ℃条件下培养, 细胞浓度为5*104 /ml. 1.3 实验分组 实验分为对照组和处理组.处理组分为 0.

125、 0.

25、 0.5 和1mmol/L PE

4 组.细胞在正常培养基中 培养24 h后, 更换为含有不同浓度PE的培养基, 并继 续培养到测试时间. 1.4 细胞增殖检测 用MTT 法测定.选用对数生长期的 HepG2 细胞, 以5*104 /ml 的细胞密度接种于

96 孔平底细胞培 养板中, 每孔总液量

200 ?l.接种第

2 天换含有不同 浓度 PE 的培养基, 继续培养到测试时间前

4 h, 每孔 加入 MTT 液20 ?l,

37 ℃、 5% CO2 下继续孵育至测试 时间, 弃上清液, 每孔加入DMSO

150 ?l, 振荡5 min, 在高通量多功能微板测试系统波长490 nm下测定每 孔光的吸收值 (D490 ) . 1.5 免疫荧光技术 将对数生长期的 HepG2 细胞, 接种于内置有适 合大小盖玻片的24孔平底细胞培养板中制备细胞爬 片.PE处理24 h, 弃去培养液, 用0.1 mol/L PBS洗细 胞爬片,

5 min*3 次, 用4%多聚甲醛固定

30 min, STAT1/2或P38一抗分别标记, 抗体稀释比为1 ∶ 50和1∶100, 用荧光二抗进行标记, 于激光共聚焦显微镜 下观察, 取图以及进行荧光分析. 1.6 统计学处理 应用SPSS11.0软件分析, 实验数据以均数±标准 差表示, 采用t检验.

2 结果 2.1 PE对HepG2细胞生长的抑制作用 PE 作为细胞膜的重要成分, 具有维持细胞膜稳 定性的作用.但是, 在培养基中加入外源 PE 可以诱 导人肝癌细胞 HepG2 细胞增殖抑制.空白对照组、 0.

125、 0.

25、 0.5 和1mmol/L PE 处理组 D490 值分别为 0.868±0.

104、 0.755±0.

020、 0.719±0.

120、 0.492±0.

013、 0.512±0.030, 可见低浓度 PE (0.125 mmol/L) 可以轻 微影响细胞生长, 而随其浓度升高, PE对HepG2细胞 生长的抑制效果有增加的趋势, 在0.5 mmol/L时达到 高峰, 0.5 和1mmol/L 组与对照组相比, 均有显著性 差异 (P 0.05) .AG490 可以部分逆转由 PE 诱导的 HepG2 细 胞生长抑制作用, 并表现浓度依赖性,

16 ?mol/L AG490的逆转效果高于8 ?mol/L (表1) . 2.3 PE诱导HepG2细胞STAT1和STAT1的表达 为了证明 PE 对STAT

1、

2 表达的影响, 本研究应 用免疫荧光技术检测 PE 处理 HepG2 细胞

24 h 后STAT

1、

2 的表达.空白对照组、 0.

125、 0.

25、 0.5 和1mmol/L PE 处理组 STAT1 荧光强度分别为 68.38± 10.

50、 95.63±13.

37、 108.44±18.

53、 144.90±23.96 和130.20±17.56, STAT2 荧光强度分别为 61.97±10.

22、 72.52 ± 11.

23、 79.89 ± 10.

10、 82.80 ± 11.99 和86.87 ± 14.38.结果显示, 随着 PE 浓度的增加, STAT1 和STAT2 的表达均有所增加, STAT1 在0.5 mmol/L PE 处理组表达达到高峰, 而STAT2在1 mmol/L PE处理 组表达达到高峰.STAT1对PE的反应强于STAT2.

3 讨论 信号转导及转录活化因子 (STATs) 是一类重要 的核转录因子, 目前已经发现7个STAT家族成员, 包括STAT

1、 STAT

2、 STAT

3、 STAT

4、 STAT5a、 STAT5b 和STAT6.其中, STAT1和STAT2参与了细胞的凋亡调 控;

而STAT3作为癌基因参与了细胞的增殖调控[5] . 本研究组在先前的研究中发现, PE 可以通过线 粒体通路诱导 HepG2 细胞发生凋亡, 从而抑制其生 长[4] .STAT1和STAT2是否也参与了该过程, 目前尚 不清楚.AG490 是JAK-2/STAT 的特异性抑制剂, 通 过抑制 JAK-2 的催化活性, 从而抑制包括 STAT