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一、技术前沿: Western Blot中的新仪器(Updated) 动态监测NK细胞杀伤活性的新工具

二、应用指南 ABI技术手册-microRNA研究指南 Affymetrix技术用于肝毒性检测

三、行业动态 Qiagen以1.35 亿美元收购Corbett 赛默飞世尔收购Open Biosystems Western Blot 中的新仪器(Updated) 二十年来,Western blot 的步骤一直都没有什么大的改变,大家还是沿用分子克隆上的技术和 试剂.不过,幸好有一些新产品不断涌现,能大大提高我们的实验效率和效果.现在 Western blot 中的趋势是荧光和化学发光检测、准确定量蛋白、自动化操作、自动冷却转印系统和 CCD 成像系 统.大家一直以来可能关注试剂比较多,不过下面提到的这些新仪器,也可以让 Western blot 更快 速、更方便呢. 让转膜不再沉闷 其实 Western blot 的原理看起来非常简 单,但就是过程很漫长,电泳、转膜、封闭、 孵育, 每一步都得花一两个小时. 如果只是偶 尔为之还好,但那些 WB 达人,几乎天天做, 就不知要奉献多少宝贵青春了. 如果现在告诉 你有一种转膜方法,只需要

7 分钟,你是不 是会很开心.Invitrogen 的干式转印仪 iBlot 就真的做到了这一点.插一句,Invitrogen 的 转印仪叫 iBlot,核酸纯化仪叫 iPrep,不知道 它们和苹果的 iPhone、 iPod 有没有关系. iBlot 是一台干式转印仪, 无需配制任何缓冲液, 只 需要 5-7 分钟就能将蛋白转到 NC 膜或 PVDF 膜上. iBlot 能实现如此快的转印, 是因为 iBlot 转印仪和凝胶转印堆积层的配合, 可以产生高 电场强度.凝胶转印堆积层(包括 Top 和Bottom 两块)中含有阳极和阴极,缓冲液和 膜(NC 膜或 PVDF 膜),你只需放入你的胶 (Tris-Glycine、Tricine 或NuPAGE 胶都可 以),赶走气泡,就可以开始转印了,再也不 需要配制大量的缓冲液+等待

2 个小时,可同 时进行两块 mini-gel (8*8cm) 或一块 midi-gel (8*13cm)的转印.效率呢,和我们常用的 湿转相当或更好.如果再配合 Invitrogen 的NuPAGE 胶和 WB 试剂盒,只需要半天就能 完成整个 WB 了, 效率那可是相当高啊. iBlot 的价格在

2 万元人民币左右,作为仪器来说 不算贵, 不过那个凝胶转印堆积层可是一次性 的,需要反复购买,价格约是

100 多一块吧. CCD 成像系统 CCD表示电荷耦合装置,它是由一种高 感光度的半导体材料制成, 能把光线转变成电 荷.随着冷却CCD技术的发展,成像系统成 本越来越低, 因而在现在的实验室里这些设备 越来越普遍.目前几乎所有Western blot的新 技术都是针对CCD成像系统的,它代替了传 统的胶片成像. 胶片成像虽然比自然发光法灵 敏度更高,但也有很多缺点:耗时,需要暗房 和显影剂,胶片很贵,而且是一个消耗品,需 要持续购买. 另外, 用胶片上的蛋白条带进行 定量几乎是 不可能的任务 ,和目测一块考马 斯蓝染的胶没什么区别.冷却型CCD照相机 与X胶片相比具有瞬时影像处理、高灵敏度、 高分辨率、 动力学范围广等优点, 而且还不需 要胶片处理装置及暗室. 然而, 这项技术要求 底物能产生高强度长持续时间的信号, 以被照 相机捕获到.不过这个也不是问题,GE、 PIERCE、 Bio-Rad、 ABI等公司都开发了信号 能持续24小时的Western blot底物或试剂盒, 而且灵敏度都超高, 达到了飞克级别, 具体请 看Western Blot显色篇:八仙过海,各 显 神通. 另外, 现在的研究者们已经不满足于只是 知道蛋白有没有,还想知道蛋白的量有多少, 与其他蛋白相比是高还是低, 定量的方法是否 准确.多色的荧光Western blot可以满足研究 者对于多蛋白分析的要求, 使我们可以检测到 电泳中重叠的蛋白条带, 如果我们用传统的化 学发光方法, 是无法将它们分开的. 多色荧光 检测还可以增加定量的准确性. 例如, 你可以 用一种荧光探针来标记目的蛋白, 用另一种荧 光探针作为上样量的标准化. 这样, 如果在某 一泳道中你的目的蛋白量有显著的增加, 你就 可以判断到底是实验的原因, 还是上样不准确 造成的.GE的Amersham ECL Plex Western blotting系统,就可以在 1-D和2-D Western blotting中进行多重检测,详细内容请看多重 2-D Western blotting和内标. 另外, Invitrogen 和PIERCE也提供同时检测两种蛋白的多重 荧光Western blot试剂盒. 说到成像, 连续三年获得生命科学产业成 像分析系统大奖的 Bio-Rad 公司在这方面当 然是技高一筹.它的 Molecular Imager VersaDoc 成像系统采用 Peltier 冷却的高分 辨率数字 CCD 技术, 并结合了独特的宽波长 紫外激发光源及高效的光学设计, 能提供卓越 的灵敏度、均一性、灵活性及动态范围,在性 能表现上可与更昂贵的以激光为基础的技术 相媲美.VersaDoc 系统可用于分析广泛的样 品,如凝胶、印迹膜、微孔板、TLC 板及放 射自显影图像等.它们拥有