编辑: kr9梯 | 2017-10-15 |
25 倍.为获得最佳的回收率,以溶质分子量的 50-80%的数值作为截留 分子量.为获得最佳的回收纯度,截留分子量则应该是杂质分子量的 50-100 倍或更大. 膜扁平宽度选择 在选择膜管的扁平宽度时,应考虑样品量和透析容器的尺寸.在大口径膜管内,分子的扩 散距离较长,膜的比表面积(表面积与容积的比率)相对较小.因此小口径膜管透析效率较高. 为方便操作透析膜管,建议透析膜管总长度(含膜夹和 10%的顶部空间)10 到15 厘米为宜.具 体可参考目录和包装标签上提供的"容积/长度"比率(ml/cm). 膜夹选择 通用膜夹(尼龙)――质地较硬的膜(如纤维素酯膜)必须使用通用膜夹,而较为柔软的膜 (如再生纤维素膜)也可使用通用膜夹.通用膜夹由尼龙制成,自然下沉特性利于保持透析膜 管垂直悬浮状态,不可对通用膜夹高温灭菌. 膜夹(聚丙烯)――膜夹仅适用于再生纤维素膜.切勿与纤维素酯膜共用,否则可能导致泄漏. 膜夹采用聚丙烯制成,自身具有浮力且可高温灭菌.共有三种类型的聚丙烯膜夹: 标准膜夹-可自行悬浮.标准膜夹用于密封透析膜管的顶端. 配重膜夹-是在标准膜夹内嵌入一根带聚四氟乙烯涂层的不锈钢条的.配重型膜夹应用于透 析膜管的底端,以使透析膜管保持垂直悬浮状态. 磁性配重型膜夹-内嵌有一根带聚四氟乙烯涂层的磁铁条.当将透析容器放在磁力搅拌器上 时,嵌入的磁铁条可以替代磁性搅拌棒,带动透析膜管旋转.建议,为确保严密的密封和防止 泄漏,膜夹的宽度应比透析膜管的扁平宽度长4到10mm.. 膜准备和储存 若生物技术级膜先前已被润湿,则切勿进行干燥处理.干燥处理可能会影响膜孔结构.为 最大限度地延长湿膜的保存期限,应定期更换防腐液. 生物技术级再生纤维素(RC) 膜准备:室温条件下,将膜浸泡在水中 15-30 分钟,以去除甘油.然后用去离子水将膜彻 底冲洗干净. 南京森贝伽生物科技有限公司
网址:http://www.senbeijia.com/ 第3页微信订购:扫一扫右侧二维码 服务热线:400-8787-820 邮箱订购:[email protected] 储藏:干膜室温条件下储藏,或放入聚乙烯袋中:4°C 环境储藏.一旦膜被润湿,则应在 4°C 环境下浸泡在下列任何一种溶液中:0.05%叠氮化钠、1%苯甲酸钠或 1%甲醛溶液. 生物技术级纤维素酯(CE) 膜准备:室温条件下,将膜浸泡在水中
15 分钟,以去除叠氮钠等防腐剂.然后用去离子水 将膜彻底冲洗干净. 储藏:4°C 环境下将膜浸泡在下列任何一种溶液中储藏:0.05%叠氮钠、1%苯甲酸钠或 1% 甲醛溶液. 膜灭菌 建议采用下列方法对生物技术级纤维素酯膜和再生纤维素膜进行灭菌: 伽马辐照,辐照剂量为20KG 环氧乙烷灭菌 由于高温灭菌可能会影响膜的孔隙和截留分子量,因此不建议使用该法. 膜处理和使用(仅供参考) 下列为常见透析的一般规则.对样品进行透析之前,需要考虑诸多因素.影响透析效率的 一些因素包括样品溶质、膜化学相容性、膜截留分子量、透析缓冲液性质、透析体积、温度等. 因此,有必要针对下列透析程序作一些优化. 1.在透析容器中加入适量的透析缓冲液.透析缓冲液容量应为样品容量的近100倍.(例如: 在1升透析液中透析10ml样品.) 2.将透析膜管剪切为适当的长度.预留出小段顶部空间,(约总容量的10%),:这样不仅 可确保透析袋悬浮,而且不会被旋转的搅拌棒损坏,按照第9页的使用指南准备透析管. 3.打开膜夹,将透析膜管置于打开的膜夹中,然后再闭合膜夹,确保膜管的一端伸出膜夹 约3到5mm.切勿将纤维素酯(CE)膜折叠. 4.将样品从开口的一端装入透析管中.调节顶部空间的长度,并用另一膜夹夹住透析膜管. 5.将透析样品放入合适的透析缓冲液中. 6.将干净的磁力搅拌棒投入透析容器中.磁力搅拌棒要足够大,以均匀搅拌全部透析缓冲 液,但亦无需太大,以免无法自由旋转.将透析容器放在磁力搅拌器上,并调整搅拌速度,使 透析液旋转形成涡流,但要避免膜管卷入涡流. 7.根据具体应用要求进行透析.一般情况下,透析可整晚进行.在透析过程中应至少更换 三次新鲜的透析液.建议在透析进行2-4小时、6-8小时以及10-14小时(次日清晨)时更换透析 液.最后一次更换透析液后,透析应至少持续2小时.注:若杂质浓度过高,样品的透析时间需 延长并需频繁地更换透析缓冲液. 8.握住顶端膜夹伸出的透析膜管,然后打开顶端膜夹.轻轻倒出透析的样品或用吸管或注 射器吸出.透析的温度主要取决于样品.不同的膜类型,有不同的温度限制.纤维素酯膜可耐 受的最高温度为37°C.再生纤维素膜可耐受的最高温度为60°C. 样品回收 抓住从膜夹伸出部分膜管,松开膜夹.倒出样品,或用巴斯德吸管或注射器吸出样品.使用24-计量型皮下注射针头小心刺穿膜管并吸取可回收极小量样品.透析通常可过夜进行.在透 析过程中,透析液可更换数次.最后一次透析液更换后,应继续透析至少2-4小时. 注意:对于高浓度污染物,可能需要更长的透析时间,透析液更换的次数也需要增加.