PDF《彭继庆博白大果油茶遗传多样性的 ISSR 研究》

the gene ?ow (Nm) among C. gigantocarpa was 1.195 4>

1.0, this is sufficient to resist the effect the genetic drift. The UPGMA cluster analysis show that the artificial populations were introduced into Jiangning, Guangxi. Comparison with natural population, the artificial populations'

genetic diversity levels was slightly lower,but there was little difference. It showed that the artificial populations had adapted to the climatic characteristics of cultivation areas. Key words: Camellia gigantocarpa;

genetic diversity;

ISSR

63 第33 卷中南林业科技大学学报种群和人工种群进行遗传多样性分析,揭示其遗 传多样性水平和遗传结构,探讨人工种群和天然 种群之间的基因差异,为博白大果油茶的引种状 况做出评价,为博白大果油茶资源保护、群体恢 复和有效利用提供指导.

1 材料与方法 1.1 样品材料 本实验样品分别采自于广西省博白县那林镇

12 个样品、广西省博白县江宁镇

11 个样品、湖南 省新宁县林业科学研究所

11 个样品及湖南省植物 园8个样品,全部为博白大果油茶优树或优树繁 殖的实生苗.为了防止采到同一母树的后代,采 样过程中保证两个单株间的距离不少于

50 m.采 同一株的

5 ~

10 g 新鲜嫩叶用湿纱布擦干净后放 到自封袋中,加入

50 ~

100 g 干燥的硅胶,保证 硅胶的质量为新鲜叶子的

10 倍,摇动袋子使硅胶 与叶子充分接触,低温保存,带回实验室,置于 -70 ℃超低温冰箱保存备用. 表1不同种源博白大果油茶地理位置及主要气象因子 Table

1 Geographical locations and main meteorological factors of different provenances of C. gigantocarpa 种源及编号 东经 北纬 海拔 /m 年均降雨量 /mm 年均温 /℃ 广西那林 109°43′59.05 22°14′58.15

322 1

800 ~

2 000 20.4 ~ 21.6 广西江宁 109°40′41.05 22°08′39.45

220 1

500 ~

18 00 21.5 ~ 22.0 湖南新宁 110°50′00.47 26°25′44.32

319 1

326 17.0 湖南植物园 113°01′37.34 28°06′22.15 98.4

1 300 16.8 ~ 17.2 1.2 引物材料 实验所用 ISSR 引物是根据加拿大哥伦比亚大 学公布的第

9 套ISSR 引物序列,由南京金斯瑞生 物科技有限公司合成,共100 条引物. 1.3 总基因组 DNA 的提取及检测 博白大果油茶总基因组 DNA 的提取采用天根 生物生化有限公司提供的植物基因组 DNA 提取试 剂盒进行提取,操作步骤按照说明书进行并作适 当调整.用1% 的琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定 仪进行检测. 1.4 引物筛选及退火温度确定 利用 ISSR 最佳反应体系和扩增程序,根据引 物序列的 Tm 值,在Tm-5℃到Tm+5℃范围内, 对每条引物进行引物筛选和退火温度确定,选取

10 条扩增条带清晰、重复性好、多态性高的引物, 用于博白大果油茶的 ISSR-PCR 扩增. 1.5 ISSR-PCR 扩增和电泳检测 利用最佳的 ISSR-PCR 反应体系、扩增程序 [8] 和筛选出的

10 条引物对所有的博白大果油茶 DNA 样品进行 PCR 扩增.利用 1.5% 的琼脂糖凝胶电 泳进行检测,凝胶成像系统拍照,得到所有 DNA 样品的扩增图像. 1.6 数据处理与分析 数据统计时,基于以下原则:同一引物的 扩增产物中,电泳迁移率一致的条带认为是同一 条带;

电泳迁移率相同,但条带强度不同,当强 带超过弱带的两倍时,视为新带;

根据 Hardy- Weinberg 平衡理论,剔除基因频率小于 3/N(N 为 样本数,本研究中 N 为42)的条带 [9] ;