PDF《细胞冻存方法的改进》

细胞冻存方法的改进 浙江大学 茵梓 背景:细胞冻存是细胞培养的重要环节之一.

利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可 以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验.而且适 度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞 保种的作用. 冻存技术要点是慢冻,标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;

当温度达-25℃以下时,可增至 -5℃~-10℃/min.我们常用的传统方法是将冻存管置于 4℃30 分钟--->-20℃60 分钟--->-80℃过夜---> 液氮罐.但是由于步骤较多,时间间隔较长,很容易遗忘.但是任何一个步骤的拖延都会严重影响细胞 存活.而市面上程序冷冻仪又价格昂贵,必要性也不高,不是每个实验室都拥有的. 方法改进: 我们考虑到泡沫塑料有很好的保温隔热效果, 同时又注意到我们购买的 BD 公司的 15ml 离心管包装里的泡沫塑料孔径与冻存管相当. 我们改进的冻存方法是: 可将细胞冻存管放入泡沫支架中, 再加盖一块同样的泡沫支架后,直接放入-80℃冰箱过夜后转移进液氮罐.该方法不但利用了废物利于 环保,而且省时省心,非常便捷有效. 结果:经我们多次实验证实,这种方法冻存细胞的复苏效果理想,细胞存活率在 90%以上.