PDF《黄芪水提物活性成分测定及对 5 种食用菌菌丝体生长的影响》

DHG-9040S电热恒温鼓风干燥箱, 宁波东南仪器有限 公司;

HH-4 数显恒温水浴锅, 江苏金坛市环宇科学仪 器厂;

RE-2000A 型旋转蒸发器, 上海市嘉鹏科技有限 公司;

BS-S 恒温振荡器, 国华电器有限公司;

QL-901 旋涡振荡器, 海门市其林贝尔仪器制造有限公司;

ME

204 电子天平, 梅特勒-托利多仪器 (上海) 有限公司;

SW-GJ-1FD系列超净工作台 (上海博讯实验有限公司 医疗设备厂) ;

SL-500A 型高速多功能粉碎机 (浙江省 永康市松青五金工具厂) . 1.4 黄芪水提物的提取制备 将黄芪先用剪刀剪成5 cm大小的段状, 放入粉碎 机中粉碎, 过60目筛后, 称取100.00 g黄芪粉末, 添加 7倍的水浸泡1 h, 在电磁炉上煮沸45 min, 边煮边搅拌 以防其变糊, 待冷却后将其在

7000 r/min 下进行离心

6 min, 收集上清液, 沉淀重复上述步骤一次, 合并提取 液.水提取液过滤后减压浓缩至

50 mL 左右, 置于 -20℃冰箱过夜, 冻干机内冻干即得黄芪水提物干粉. 精密称取0.2 g黄芪水提物用水定容至10 mL, 0.45 μm 滤膜过滤, 置于4℃冰箱备用. 1.5 黄芪水提物的成分含量测定 1.5.1 总皂苷的测定 黄芪总皂苷以黄芪甲苷作为标准 品.精密称取2.5 mg黄芪甲苷标准品, 用无水乙醇定 容至5 mL容量瓶, 制成浓度为0.5 mg/mL溶液.分别 吸取

30、

60、

90、

120、

150、

180、

240、

300 μL 溶液, 用无 水乙醇补至 0.3 mL.加入 0.3 mL 8%香草醛溶液 (乙 醇为溶剂) , 摇匀, 在冰浴中加入

3 mL 72%硫酸溶液, 摇匀.在62℃水浴中反应

20 min, 摇匀.用酶标仪扫 描波长, 确定在

542 nm 处有最大吸收, 因此在

542 nm ・ ・

44 处测其吸光值, 并绘制标准曲线. 将黄芪水提物溶液稀释10倍, 吸取0.3 mL黄芪水 提物溶液按照上述步骤测定样品中的黄芪总皂苷含 量, 重复3次并计算黄芪总皂苷含量. 1.5.2 总黄酮的测定 总黄酮含量测定采用硼氢化钠/ 四氯苯醌法, 黄芪总黄酮测定以槲皮素作为标准品. 精密称取60 mg槲皮素, 用四氢呋喃和乙醇1:1的溶液 定容至

10 mL, 将其配成浓度为 0.

3、 1.

0、 1.

2、 1.

5、 2.

4、 3.

6、 4.

0、 4.

5、

5 mg/mL.分别吸取1 mL, 向样品管与标 准品管中加入 0.5 mL

50 mmol/L 硼氢化钠与 0.5 mL 74.6 mmol/L AlCl3 室温振荡30 min. 加入0.5 mL

50 mmol/L 硼氢化钠 , 室温振荡

30 min.加入

2 mL 0.8 mol/L 冷乙酸, 避免光照.室温振荡 15min.加入

1 mL

20 mmol/L 四氯苯醌, 95℃水浴

60 min.反应过 程中不时取出摇匀.反应结束后自来水冷却.溶液转 移到玻璃管中, 甲醇定容至

4 mL.向管中加入

1 mL 16%香草醛溶液, 混合后加入

2 mL 浓HCl 混合, 黑暗 室温反应15 min.2500 r/min离心3 min.从管中各取

200 μL 上清液加入到

96 孔板中, 用酶标仪

490 nm 测 吸光值.绘制黄芪总黄酮标准曲线. 精密吸取1 mL黄芪水提物溶液, 按照上述步骤得 到吸光值, 重复3次并计算总黄酮的含量. 1.5.3 总酚酸的测定 总黄酚酸含量测定采用福林酚 法,黄芪总酚以没食子酸作为标准品.精密称取

100 mg 没食子酸, 用去离子水定容至

250 mL, 得到

400 μg/mL母液.将其稀释至浓度为

20、

80、

120、

150、

200、

300、

400 μg/mL.分别吸取

100 μL 标准品, 加入

400 μL去离子水, 摇匀, 加入100 μL福林酚试剂, 反应

6 min.加入1 mL 10%的Na2CO3 溶液, 加入1 mL去离 子水, 黑暗条件下静置60 min后用酶标仪于760 nm处 测量吸光值, 并绘制成标准曲线. 精密吸取100 μL黄芪水提物溶液, 按照上述步骤 测定样品中的总酚含量, 重复3次并计算总酚含量. 1.5.4 总多糖含量测定 总多糖含量测定采用硫酸/苯 酚法, 总多糖以葡萄糖作为标准品.精密称取