PDF《96T》

小鼠 小鼠 小鼠 小鼠增殖诱导配体 增殖诱导配体 增殖诱导配体 增殖诱导配体( ( ( (APRIL) ) ) )酶联免疫 酶联免疫 酶联免疫 酶联免疫分析 分析 分析 分析 试剂 试剂 试剂 试剂盒使用说明书 盒使用说明书 盒使用说明书 盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用.

检测范围 检测范围 检测范围 检测范围: : : : 96T 0.7ng/ml -30ng/ml 使用目的 使用目的 使用目的 使用目的: : : : 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中增殖诱导配体(APRIL)含量. 实验原理 实验原理 实验原理 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠增殖诱导配体(APRIL)水平.用纯化的小 鼠增殖诱导配体(APRIL)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 增殖诱导配体(APRIL) ,再与 HRP 标记的增殖诱导配体(APRIL)抗体结合,形成抗体- 抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色.TMB 在HRP 酶的催化下转化成 蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的增殖诱导配体(APRIL) 呈正相关.用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值) ,通过标准曲线计算样品中小鼠 增殖诱导配体(APRIL)浓度. 试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml*1 瓶7终止液 6ml*1 瓶2酶标试剂 6ml*1 瓶8标准品(48ng/ml) 0.5ml*1 瓶3酶标包被板

12 孔*8 条9标准品稀释液 1.5ml*1 瓶4样品稀释液 6ml*1 瓶10 说明书

1 份5显色剂 A 液6ml*1 瓶11 封板膜

2 张6显色剂 B 液6ml*1/瓶12 密封袋

1 个 标本 标本 标本 标本要求 要求 要求 要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验.若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含 NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性. 操作步骤 操作步骤 操作步骤 操作步骤 1. 标准品的稀释: 本试剂盒提供原倍标准品一支, 用户可按照下列

图表在小试管中进行稀 释. 24ng/ml

5 号标准品 150?l 的原倍标准品加入 150?l 标准品稀释液 12ng/ml

4 号标准品 150?l 的5号标准品加入 150?l 标准品稀释液 6ng/ml

3 号标准品 150?l 的4号标准品加入 150?l 标准品稀释液 3ng/ml

2 号标准品 150?l 的3号标准品加入 150?l 标准品稀释液 1.5ng/ml

1 号标准品 150?l 的2号标准品加入 150?l 标准品稀释液 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、标准孔、 待测样品孔. 在酶标包被板上标准品准确加样 50?l, 待测样品孔中先加样品稀释液 40?l, 然后再加待测样品 10?l(样品最终稀释度为

5 倍) .加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀. 3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育

30 分钟. 4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水

30 倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置

30 秒后弃去,如此 重复

5 次,拍干. 6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50?l,空白孔除外. 7. 温育:操作同 3. 8. 洗涤:操作同 5. 9. 显色:每孔先加入显色剂 A50?l,再加入显色剂 B50?l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟. 10. 终止:每孔加终止液 50?l,终止反应(此时蓝色立转黄色) . 11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) . 测定应在加终止 液后