PDF《酶联 印迹 法》

病毒学杂 志,勺只酶联印迹法 一 应考虑 的几个技术要素 不、一 一 几二用.

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,打几,.,二少,理,月. 又提要本文对蛋自质 的于一二烷基硫酸钠一聚丙晰酞 胺凝胶电泳 , 酶联印迹 注的奈件和所用 试剂的改进进行了讨论.的应用 已在各 种研 究和日常临床 检 测得 到证实.文章着重 阐 明有关 印迹 的条汁、灵软度、试齐和仪器的使 用局限性、样品的处理和加片诸 方面的问题 . 引 酶联 印迹 法义称,在不 到六 年的时 间里 已催本上 从一种 研究 技 术逐 渐发展成 一种 临床 检测 手段 . 由于大部分研 究程 序经常变 动,也经历 了一些 重大改进 . 最近有几 篇综述文 章等,与,,

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, 与,讨论了这 类方 法 的演 变 与改进 . 最 初介绍 的 等,分为 三步 工用一将复杂 的生 物大分子或简 单 的生 物大分 子 混合 物分开 . 五用第二 次定 向 电泳将被 分开 的分 子从凝胶转移 到硝酸纤 维 素膜 , 牢 固地 结合 于膜 上,这一步一般被称为 印迹 . 不 第一步 被 分开 , 第二 步 印迹 到硝酸纤 维 素膜 上 的大分 子 与抗 体结合 , 通 过酶 联免疫吸 附测定 而被 检测 出.乍文 着重 阐述 免疫 印迹 法 的实际 应川与方法 学方 而的问题 . 我们 介 绍的蛋 白质 免疫 印迹 法 已详 述于疾病防治附属 中心 的一本 名为 人 类免 疫缺 陷性病毒 , 原称・皿抗体 的酶 联 印迹 的手册中.?1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 病毛 攀学杂志,日℃这一详细方 法在疾 病 防治附属 中心 及 其它地方所进 行 的许 多实验 课程 已广 泛试 验过,所编入 的大 部分 内容是近 年来改进 的技术 , 我将讨 论这 一技 术钉 一步的构成 及其最佳试 验条件 . 步骤 一一在介绍 蛋 白质 印迹 技术 的应 用 方面 , 等报道了用凝胶 与缓 冲系 统 分析 处理 的蛋 白质 , 这是当今 最通用的一系统之一.我们 选择了一种改良的 、 不 连续 的一硼酸盐 一硫酸盐 一 氯化物缓 冲系统 等,'

等,等,制备梯度 凝胶 , 优选 这 一系统 的原 因是 分辨 率高 、 谱 带补 兮晰,即令用 单一 百 分比 的 凝胶 替代梯度 凝胶 时,这个缓 冲系统 也 能形 成洁 晰狭窄的谱带.而且 由于这 一缓冲系 统极高 的 堆集 效应,即使是 很稀的样品也能被浓 缩成 狭 窄的谱带 , 因而 只需极其少 量的 样品 见后面的样 品 处理 及加 样部分.我们 也试 验过其它缓 冲液和凝胶 系统 , 包括 系统 , 但产生 的所 有谱带 均比我们 选用 系统的谱带宽 . 虽 然事实上所 有被 试的一系统都 能用于印迹 法,但我们 观察到转 移率较低的现象,特别是用等 电聚 焦凝胶 时,然而 其最 终 结果 还 是可 用的.许多系统的印迹效率小于 , 不 同蛋 白质 转移 的量也不 同.步骤 卫一 印迹 文献 中介绍 了 各种 缓 冲液 与 电泳 条件.最近的一 篇综 述等,中列举 了一些最常 见的条件 . 在这一步我们 与 等人 的方 法相 比有很大的差 别,法是 蛋 白印迹最 普通 的方 法.表说明了这 两种 印迹 系统 的主 要区别.谈到印迹系统 的条件,我认为 印迹 期 间所 用的电流量是其最 重要的因素,尤其是在高电场 强度 下,对高 分子量化合物 来说 , 蛋 白质 从凝胶 转移到硝 酸纤 维 素膜 的效 率显 然较高.表与表 列举的实 验数据 阐明 了这 一现 象.预染的标 准分 子量蛋 白 ,从马里兰 州购买,这些蛋 白质按 以 前介绍 的方法 等,重新配制 、 处理 与存放 . 每份川的预染蛋 白用 两 块相 同的创石凝胶 一分离后 按表所列条件 印迹分钟 . 从表 所 介绍 的数 据可 清楚看出,较高的印迹 电流确 实促 进蛋自质 分 子从凝胶 转移 到硝酸纤维 素膜 上,这对分子量大于 万道 尔顿 的 分子 如肌球 蛋自尤为明显 . 同时,一般担心 的 过度 印迹 卜和失去一些 低分子 量蛋白看来 尚未 发现 见表有关价 乳球蛋 白和 溶菌酶 的 资料 . 刘'