PDF《王增福 , 崔治中3 3 , 张志,吴永平》

33 通迅作者 :崔治中(1944~) ,汉族 ,江苏江阴籍 ,教授 ,博士 ,研究方向为分子病毒学. Correspondingauthor. Tel :053828241560. E2mail :zzcui @sadu. edu. cn ? 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 的 ,但是在一些已引进多年的品系中净化过程还在 进行中. RNA 病毒尤其是反转录病毒的一个非常显著 的特征就是病毒的 RNA 聚合酶缺乏校对机制 ,从 而造成了遗传上的不稳定性和多样性[5 ] .Venugo2 pal 等人比较了

12 株新分离的 ALV2J 和HPRS2

103 株的囊膜糖蛋白的氨基酸序列 ,结果表明它们 的同源性在 92.

0 %~98.

8 % ,从而揭示了 ALV2J 抗原性的变异[6] .Silva 等人将从美国不同鸡场分 离到的 ALV2J 野毒株与 HPRS2103 株的囊膜糖蛋 白的氨基酸序列进行了比较 ,也揭示了 ALV2J Env 基因上的高变区域[7 ] .在过去几年中 ,先后分析了

199922001 年期间从国内分离的

8 个野毒株 GP85 蛋白氨基酸序列的变异性 ,并与英国和美国分离株 做了比较[8~10] ,发现这三年中分离到的 ALV2J 野毒 株的 GP85 的氨基酸序列与原型株 HPRS2103 的变 异不再有扩大的趋势.然而当时只是对

1999 ~

2001 年三年的中国分离株与国外参考毒株进行了 比较 ,年份及毒株数量都相对不够充分 ,未能下结 论.2002~2003 年又从不同省份分离到

6 个毒株 , 本研究对这些新分离野毒株的 g p85 基因也进行了 测序 ,对1999~2003 年连续五年期间分离到的毒株 的Gp85 蛋白的氨基酸序列进行了比较 ,进一步阐 明我国 ALV2J 流行野毒株的 GP85 的变异规律和 趋势 ,并推测随着在免疫选择压的作用下逐年变异 , 新出现的野毒株的 GP85 与原型株 HPRS2103 的差 异是否会越来越大. 在本研究中 ,在1999 年到

2003 年这连续五年 的时间里 ,陆续从全国各地分离到 ALV2J , 其中 BJ

0301、 BJ0302 和BJ0303 分离自同一鸡场 ,对这些 野毒株的 env 基因进行了克隆和测序 ,这段序列包 括完整的 env 基因 ( g p85 和gp37 基因) 、 E 元件以 及部分 3′ 端LTR 序列 ,将它们与原型株 HPRS2103 株的 GP85 蛋白进行了比较 ,旨在研究随着时间的 推移 ,ALV2J 中国野毒株 GP85 蛋白的变异趋势 ,以 及免疫选择压作用对它变异趋势的影响.

1 材料与方法 1.

1 细胞的制备 用于分离病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF) 用孵化 到10 日龄的 SPF 鸡胚按常规方法制成. 1.

2 病料来源

14 株中国野毒株的背景见表 1.YZ9901 及2003 年所有分离毒株均来自活鸡 ,其它均为已死病鸡. 1.

3 病毒分离 1999~2002 年用以下方法分离毒株 :将肝脏和 脾脏混合研磨后 ,将悬液用 0.

22 μm 的滤器过滤后 接种 CEF. 表1J亚群白血病病毒中国分离株的背景 Table

1 The background of

16 Chinese field strains of ALV2J Strains Year Company Type Age (weeks) Tumor lesions IFA with Mab J E9 PCR for env gene SD9901

1999 A PS

45 Many small tumor spots + + in liver and spleen SD9902

1999 A PS

45 Many small tumor spots + + in liver and spleen YZ9901

1999 B ? Cb

7 No typical lesion + + SD0001

2000 ? PS

30 Many small tumor nodules in liver + + and spleen , on ribs and sternum SD0002

2000 A ? Cb

425 Many small tumor spots + + in liver and spleen SD0101

2001 B PS

55 Many small tumor spots + + in liver and spleen HN0101

2001 C PS

26 Many small tumor spots + + in liver and spleen NX0101

2001 A PS

22 Many small tumor nodules in liver + + and spleen , on ribs and sternum SD0201