PDF《1 材 料与 方法》

2 . E P C细胞上仍无 C P E产生.此外, 选用与人类亲源 关系较为接近的哺乳动物非洲绿猴肾( v r . ) 和地 鼠 肾细 胞系( B HK) 进行了细 胞 感染 实验,结果表 明、37℃培 养条件下 ,G C R V 能使 C I K细胞 产生 C P E. 表1GC RV ~ 】 的细胞感染殛中和实验 T I b l e

1 C P E( T CI Dm d e t e r mi n a t i o n

0 f GC R V J a n d I t s s e r l l m n c n t r i a l l z a t i e n l e s t No t e: F

1 . F

2 a n d F

3 p r i n t g e n e r a t i n gt i mei n c e l l e ~ l '

t u r e c . v c t e s .CI K p s t

3 7 V C on t r o l S NT : S e r u m Ne u t r i a t i ~t i o n Te s r 而 对哺乳 动物 B HK , V E R O 细 胞不 敏感 ( 表1).根 据对 三株 G CR V 毒株的免疫原性 比较 研究.选用免疫原性强的G C R V m毒株抗体与 G C R V , 毒株 进行了细胞中和实验, 结 果表 明GCR V m 抗体能有 维普资讯 http://www.cqvip.com l

8 0 中国病毒学第17卷 效地 中和 GC R V 抗原(表1).说明GC R V9

9 l 抗原具有 与GCR V 抗 体的结 合能力 .

2 2 G C R V , 病毒的形态结构与免疫复合物 将GCRV~. 组 织浸取 液感 染CIK细 胞,经2~3 次 传代 , 收集裂 解 的细 胞病 毒 悬液 .该病 毒 悬液 经一30℃冻融3次, 离心浓缩病毒样品, 然后采用CsC[密度梯 度 离心 分离不同结 构的病毒蛋白收集的不同密度病毒样品, 在电镜下观察到三种不同 结构 的病 毒颗粒 即完整病 毒颗粒, 病毒空壳 和核心(图1A, B, C) .图1A显示完整的病 毒结构,图1b为失 去病毒 核酸的外层 与 内屡 衣壳 , 图1C病 毒表面可见明显的钉状物突起, 这是外层衣壳裂解后的 病 毒桉 心结构 .推测 其钉 状物 为病毒 转录复制 时枝 蛋 白运 送通道 .此外 , 将GCRV细胞 病毒 悬液 与GCR在37℃浮 育1h,离心沉淀后 , 在 电镜 下观察到 大量成 片的结构 不很 清晰 的病毒 颗粒即 免疫 复 台物 , 这 是因 为病 毒颗 粒 的表 面 为特 异 抗体 所包被(图1D) . 此结构表明GCRVs抗体能与GCRV抗原产生特 异1生免疫 反应 . 田1GC R V~ 的结 构 免龌复合: 由Fig1Fine S t r u c t ur e . GCRV, ~l a n d l b i m m~ o c o mp o u a d wi t h GCRV~3~ d b o d y Al l ma c t Vi d o n;

B.

2 La y e r Ca p e i s i d e s :Cl Vi r u s~ k >

r e;

D. Vi r ~ .

1 m m u n ~ o mp o u n d B a r

1 0 Oh m

2 ,

3 G C R

9 l 的核 酸与 结构 蛋 白分析 将纯化的 G C R V9

9 】 与GCRVs3桉酸 在相I 刮的电 泳条 件下进行 分离, 所得结 果见冈2A.从图 巾可 以 看出, C K _ '

R V

9 9 l 的核酸大小与带型与 G CR V t ・ 分 相似 . 以DNA Ma r k e r为标 准, 测得 各基因片段 分子量近似 值 见表

2 .为确 定成 熟 病毒 颗粒的多 肽组 分, 我们对 梯 度纯 化 的完 整 病毒 颗 粒进 行 了结 构蛋 白分析 ;

S D S ― P AG E电泳计算机凝胶扫描结构显示, G C R V 含有 5条主要与 2条微量结构多肽.其中 3条高分子量多肽为

1 3

8 、

1 3

6 、

1 3

2 k D, 2条中分子量 多肽 为

82、65kDa , 另外 2条 低分 子量多肽 各为

43、34kDa(图2B) .根据 已发表的 GC R V , GC R V 核酸 蛋 白研 究报道 , 本研 究结 果在 结构 多肽 的数量 与分子量测定上与先前的报道差异很大 : , 但符合 呼肠 孤病毒科及水生呼腑孤病毒属结构蛋白特 性_l.我 们认 为过去报 道的 G C R V 结构 蛋 白为

1 1 条多 肽 的结 论 可能与 样品纯 度等实验 误 差有关 .