PDF《中国病毒学》

广印z 一一第8卷第3期1993年9月 中国病毒学Vm O L O G I CA s I N A 蝴)V0

1 .

8 No ;

3 S 叩E.1993 人巨细胞病毒 A D I

6 株感染家兔致病机理的初步研究' 童翌刘建军杨占 秋姚学军.堕苎z1.,彭倩(1_湖北 医学院病毒研究所

2 . 湖北医学院附属第二 医院 , 武设 .

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0 0

7 1 ) 提要考证 了感 染期 间 本文试用家兔作 H O A V感染致病机制模型研究. 甩家兔荧光击及病毒再分离技术 f ;

的病毒血症动态.观察刭兔在原发性病毒感染后的第

1 3 天病毒首先在单核细胞 ( Mc ) 、 淋巴细胞 ( 【 c ) 中显现 , 并向血浆捧放病毒 . 进而随血道播散至全身组织 . 弓l起相应靶器官感 染致病 . 美键词写霉季,f动物模型、嗍施HCMV " 过去 一直 为人们视 为高种属 特异性病毒 , 因而对它的动物模型进行研究 的人不多 加之 HC l d V 在体 内外复制 周期较长 , 较复杂 , 在 临床上还有表现症状感染型 、 无症状亚感染 型及潜伏 塑等[ 日,这些使 我们对 H C M V致病机 制 细节 的认识 变得 相当困难 .我 们在用 家兔 作HCMV感 染的动物模型试探 性研 究中 , 初步获得一些结果和新启发 , 现介绍如下 : 材料与方法

1 家兔 选2―3 月蚤 晕 西班牙种短毛白兔共七只( 体重

1 .

5 ―2 .

0 k s ) , 由本院动物室提供.

2 病毒 H C M VA D 】 ・ ・ 株,经HEL细胞中增殖

1 4 天至

8 0 %细胞发生典型的 H C MV感染后 C P E , 再经反复 3次 冻融 ,

3 0 O t ~ / m,

2 0 r a i n 离心处理 . 取上清滴定 T C I D ~ o =1

0 一, 贮-S O ' C 待用. , 增殖及分离病毒用细胞 取 自健康孕妇中期妊娠水囊引产胎儿肺组织 , 按文献割备原代及传代细胞跚, 用 前经 F A法HcMV一^ E 检测为阴性 . ' 动物接种 选择淋巴液回收丰富和血液吸收丰富的背 、 腹股沟和爪掌等皮下进行多点 , 少量(

3 m l / 次) , 多次( 共3次,间隔

5 ―6 h / 次) 注射接种及口腔和外生殖器粘膜处作涂搽感染.病毒感染滴度

1 0 ,

1 口o/.I血样采集 、 处理 自感染当天稍后起进行间 日采血 . 经EDTA抗凝 . H E o r 墙que一1

0 7

7 分层液分离血浆及 白 细胞 - 血浆贮一8

0 ℃作特异 A g 及Ab动态分析.白细胞

1 式2份用作 H c Ⅲ 血细胞分类感染动态及扁毒再分 离.5兔体征 、 解剖学及组织学观察 兔接种 H C M V后.分笼饲养 . 坚持体征观察 , 结台病毒血症动态确定适宜处 杀时机 , 尔后进行解剖学及脏器病捡. T 病毒再分离 将分离用血浆及 白细胞( 需破碎处理) 分别接种新制单层 I ' lL ( 含扉片) ,

3 7 " (

3 吸附

1 h , 加5F蹿E 丑出维持液继续培养 ,

2 ―3日半量换液一次 ,

1 ―2 周盲传代一次, ―般追查

3 ―4 代.

8 鱼血细胞 和再 分离 标本 测试 白细 胞经 抗HC ~ I V- -Mc . A b . F A法检测.再 分离 实验除 定期 作刮片FA法 检外,还注 意=州所致 C P E .c P E呈现后 , 取扉片作 H- -E染色查包涵体[

3 ] . g 血清特异 ^ b动态 采用 I F A法,见文献Ⅲ . 结果与讨论 ・ 本文 于】992年1月24日收到 . 】

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3 年 2月

1 6日恪 回 维普资讯 http://www.cqvip.com 第3期高又新等;

人巨细胞病毒A Dl ' g 株感染家兔致病机理的初步研究

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1 1 F A法检测实验兔病 毒血症动 态及定 位:

(一)兔感染 H C M V后.血浆 中除接 种当天 可检 到 滴度很低的弥散 A g 外,一般病 毒Ag检出较 晚(