PDF《ELISA Immuno Explorer》

清洗掉没有结合的一抗 3. 加入标记了酶的二抗并待之与一抗结合;

清洗掉没有结合的二抗 4. 加入底物,与酶结合后会成有色产物 5. 若果没有相应的抗原存在,则抗体会被洗掉,故加入底物后亦不会显色 6. 因此,我们能从它有否显色来判断对应的抗原是否存在 实验试剂: 测试样本 (黄色小管), 0.75ml

4 支 阳性样本 (紫色小管(+)), 0.25ml

1 支 阴性样本 (蓝色小管(-)), 0.25ml

1 支 第一抗体 (绿色小管(PA)), 1ml

1 支 第二抗体 (橙色小管(SA)), 1ml

1 支 酶底物 (啡色小管(SUB)), 1ml

1 支 清洗缓冲液, 45ml

1 支 实验步骤: 1) 每组取三支黄色小管, 用marker 笔在管上写上自己组的名字 2) 每组使用一个

12 孔strip, 先用 marker 笔在 strip 上作出标记(如下图) 利用 20-200ul 移液枪, 在标有 O 标记的孔中加入 50ul 的原测试样本 3) 找一组同学, 利用 100-1000ul 移液枪, 把700ul 的黄色小管中的样本加入对方的黄色小管 中, 盖上盖子, 然后轻轻摇晃, 使之混合 4) 然后再利用 100-1000ul 移液枪, 把700ul 的对方的黄色小管中 的样本放回自身的黄色小管中, 然后在右表中记录和你交换过 样本的组别的名字 5) 找其它组别, 重覆步骤

2 和3两次, 记下交换过样本的组别名 字#1 #2 #3 M 混合样本 原本 M M O O O 澳门科学技术协进会 6) 利用 20-200ul 移液枪, 分别在

3 个有 + 标记的孔中加入 50ul 的阳性样本(+). 7) 更换新的枪头, 分别在

3 个有 - 标记的孔中加入 50ul 的阴性样本(-). 8) 更换新的枪头, 分别在

3 个有 M 标记的孔中加入 50ul 的三支混合样本 9) 等待

5 分钟, 让蛋白质能依附在孔上 10) 清洗步骤: a. 把strip 上下倒转, 让液体流在纸巾上, 轻拍 strip 数次, 注意不要过份用力, 避免样 本溅回孔中 b. 丢掉头几张纸巾 c. 利用 20-200ul 移液枪, 在所有孔中分别加入 150ul 的清洗缓冲液 [1. 不要加得太满, 避免缓冲液由一个孔流到另一个孔中 2. 枪头不要碰到孔壁, 和不要碰到己加入孔中的缓冲液, 这样可以避免更换新的枪 头] d. 重覆步骤 a 和b11) 重覆步骤

13 12) 更换新的枪头, 利用 20-200ul 移液枪, 在12 个 孔中各加入 50ul 的第一抗体(PA), 静置

5 分钟, 让抗体和抗原结合 [枪头不要碰到孔壁, 和不要碰到己加入孔中的 缓冲液, 这样可以避免更换新的枪头] 13) 重覆步骤

13 两次, 冲走未结合的第一抗体 14) 更换新的枪头, 利用 20-200ul 移液枪, 在12 个 孔中各加入 50ul 的第二抗体(SA), 静置

5 分钟, 让抗体和抗体结合 [枪头不要碰到孔壁, 和不要碰到己加入孔中的 缓冲液, 这样可以避免更换新的枪头] 15) 重覆步骤

13 三次, 冲走未结合的第二抗体 第一抗体 第二抗体 澳门科学技术协进会 16) 更换新的枪头, 利用 20-200ul 移液枪, 在12 个 孔中各加入 50ul 的酶底物(SUB A), 静置

5 分钟, 然后观察结果. [枪头不要碰到孔壁, 和不要碰到己加入孔中的 缓冲液, 这样可以避免更换新的枪头] 问题与讨论 1. 你知道一些疾病的途径传播吗? 2. 假若你的样本对检测呈阳性反应 , 这代表你与起初受感染的学生有直接交流吗?那你可以 解释疾病如何在一个社区中传播吗? 3. 如何能有效地避免受到疾病感染? 酶底物 ........