PDF《蓐昔第2期》

5 舶戊 =硅一2多聚甲醛 混合 固定 液和

2 四氧 化锇 双重 固定.常 规 脱水 ,E p o n

81 2树脂包埋 ,用Re i c h e r t ― J u n g Ul t r a ~ u l E型超薄切片 机 切片 ,醋酸铀和柠檬酸 铅复 台染色.

四、免疫电镶涓 血清反应 铜 网沾 取太蒜寤毒 祖提纯物(租病 什液)用

0 .

0 6

6 r a o l / L p H7 .

0 P B滴洗后,漂在一滴1;

1

0 稀释的OYDV 兔 抗血 清上 , ~3

0 mi n - - l h r . 再用PB和双 蒸水 分别ii{i冼后用

2 磷钨酸负染 色.制备好 样 品均 在Hi t a c h i H 一600型 J E OL J E M一1200Ex型 电镜下观察(O YD V 抗血 清 为上 海复 旦大学生 物系病毒室 蹭给)

五、耐温艰 点涓 定本试验用热 处理法,先 把蒜瓣剥去 外皮,每处理用2

0 瓣,纱布 包扎 后在

3 5 C、

4 0 ℃ 、

4 5 C,

5 0 ℃、 s

5 ℃ 的恒温下各处瑾10rai n ,2

0 r ai n 和40rai n ,误差不超过0.s℃;

对 照用 冷水浸10rai n , 处 理后 播 花盆 内置防虫温 室 观察 ,并作电镜 检查 六 ,太 尊霸 的撮 纯 大蒜病毒的提纯方法参考 A P e n a ― I g l e s i a s 和PilanAyuso(

1 9

8 2 )的程序I '

l , 采用如下三 种 浇程 (见下页). 用上述最后悬浮的粗提物分到稀释2 l 倍,4

2 倍 后在 日本岛律 u v一2lOA型紫外分光光度计上 浏紫外吸 收峰,., 甩擅维普资讯 http://www.cqvip.com 第2期陆美戚等;

浙扛大蒜府毒的毒源鉴定 I

9 9 藏曩

5 上清 上清病叶3

0 0 g 液氮冰冻、粉 碎流罹1藏程2一l_】加4

5 D m

1 1 /

1 5 ~ o i / L f _ - 加6

0 0 ~

1 0 .

5 m o l / L P H

8 .

1 B B p H

7 . s P B

0 .

0 5 mo l / L : ~1

0 .

2 嘶巯基乙醇 … 坏血酸0.2和EDTAf氯仿150ml'

警考10.2和巯基乙醇f四氯化碳150ml为丢弃}-2.匀浆 过滤 l 一2.匀浆

3 . 加等量澄清莉 一l一37S00r/m(

1 0

0 0 g g ) l 氯仿 或正丁醇 Vl V l

1 0 r a i n l

4 ℃搅拌s 一10rai n 沉淀一 l . 加s 和P E G( Mw6

0 0

0 ) w/ v 【 .

4 .

3 口OOr/mISml a l

1 .

7 s 嗑N a C

1 / V 沉淀匿清剂十5 . 水相l O

0 0

0 g l O m i n 』

4 ℃搅拌溶解.

4 ℃冰箱4 h ― ― ― l 重复

2 ―3 次l―s.1O000g10min沉淀 .

1 -

6 .

2 8

0 0

0 -

3 0

0 0

0 r / m 上清 一i-6.加1

2 0 ~ I B B 台0.5mol/L屎l2hj素、

0 .

4 5 -

0 S g l L E D T A悬6.加6 和P E C ( M W. 上清一 l _

7 适量P B 悬浮 { 浮 搅拌

4 ℃ 过夜

6 0

0 0 ) 十8 . S O

0 0 r / m l O ml n 一7.10000g10ml n

3 和Ne.C1沉淀一 l -

9 . 邵得病毒液 沉淀一 一8.加T r i t o n X 一1Bo最终旅度

4 ℃搅拌溶解 f 《 为1 % v / v

4 ℃3

0 m i n

4 ℃6 ―1

2 h I 沉淀一

1 .

9 .

7 8

0 0

0 g

9 0 m i n

7 .

7 0

0 0 - -1

0 0

0 0

3 / j ~~- '

-

1 0 . 用5 - -6 m l 上述B B 悬浮

2 0 m i n f i 即得B.加3 ―4 倍体积 的Il.0.2mo l / L p H7

5 P B 悬浮J J 重复6 ―8 步骤l 一2 蒎lI即得 P B悬浮 的祖提枷 l l 图1.太蒜叶上的 黄条病 状Fi g

1 Yel l o w s t r e日k日ympr om } oⅡ C a r l i c I e

4 T e '

结果

一、大蒜病毒病发病情 况 田间调查各产 区都 有病毒病 ,病状 有花叶、 黄条、 扭 曲捻播, 见图 l、

2 上海 嘉定 蒜和 江苏太仓蒜较 耐病, 但 病状 不明显的植株用 电镜检查也都有 病毒 粒子,只是数 量较 少.就1987年5月2

2 日调查 5户同一 丘地上的浙 江余姚 白蒜 和太仓白蒜 的发病 率分 别为