PDF《定茶叶中的咖啡因（LC+UV）》

The world leader in serving science 方法开发报告: 2013-APP-RLC-035-液相色谱紫外检测器测 定茶叶中的咖啡因(LC+UV) 检测项目 咖啡因 样品基体 茶叶 仪器型号 Ultimate

3000 系列: 泵:LPG-3400SD 自动进样器: WPS-3000SL 柱温箱:TCC-3000RS 检测器: VWD -

3100 色谱软件:Chromeleon Chromatography Data System 色谱柱类型尺寸、 S/N 号及 柱温 Acclaim

120 C18,

150 * 4.

6mm , 3um , P/N:059133,S/N:002689;

35℃ 检测器类型、工作参数及 S/N 号UVD,274nm 流动相组成及流速 乙腈-0.1%甲酸, 0-10min, 10:90, 10-20min, 乙腈从 10%-50%. 流速为 1.0 ml/min. 进样体积 10uL 1. 简介 茶叶系山茶科植物茶树(Camellia sinensisO.Ktze)的干燥嫩叶或叶芽, 是一种传统的药食同源的天然保健饮品. 茶叶中含有咖啡碱、 茶多酚、 维生素类、 矿物质、氨基酸和脂多糖等物质,咖啡因是中枢神经系统的兴奋药,对心血管系 统具有正性作用, 还能促进胃酸分泌和治疗偏头痛等疾病. 由于卫生部药品标准 中药成方制剂第十八册中规定的茶叶提取物采用紫外吸收法测定咖啡因的含量, 缺乏专属性. 根据咖啡因具有紫外吸收的特性, 采用高效液相法对茶叶提取物中 咖啡因的含量进行测定,并进行了方法学研究. The world leader in serving science 图1 咖啡因分子结构式 2. 标准品前处理 取咖啡因 25.0mg,置25ml 量瓶中,加甲醇:水(1:4)使溶解,摇匀,即得. 然后, 再用水稀释至标准工作溶液,最终浓度为

5、

10、

125、

250、

500 ug/ml. 3. 样品前处理 称取2.0g 茶叶置于250mL 圆底烧瓶中, 加入50mL 95%乙醇和水(体积比4∶ 1) 的混合溶剂, 搅拌使溶剂完全浸润茶叶, 放置浸泡10min, 然后置于超声清 洗仪中提取 [1] ,提取后滤液过滤、离心,过0.45um滤膜,即得. 样品名称及编号:红茶-HC,龙井-LJ,茉莉花茶-MLH, 普洱茶-PE,铁观音 -TGY.以上茶叶均为市售品. 4. 分析结果与谱图 4.1 咖啡因标准溶液谱图及标准曲线分析结果 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 -50

100 200

350 201307 #3 [modified by LLiu]

250 UV_VIS_1 mAU min

1 - 咖啡因 - 5.873 WVL:274 nm 图1咖啡因标准溶液谱图 表1咖啡因标准溶液分析结果 No. Peak Name Cal.Type #Points Coeff.Det. % Offset Slope

1 咖啡因 LOff

5 99.9 -2.4342 0.3607 The world leader in serving science -50

0 50

100 150

200 250

0 50

100 150

200 250

300 350

400 450

500 550

600 咖啡因 External UV_VIS_1 Area [mAU*min] 图2咖啡因标准曲线图 咖啡因 100% at 5.88 min -20

50 100

160 200

220 240

260 280

300 320

340 360

380 400 % nm 274.7 327.4 咖啡因 50% at 5.82 min: 999.83 咖啡因 -50% at 5.93 min: 999.83 图3咖啡因标准溶液峰纯度图 从以上

图表,可以看出咖啡因的线性回归系数较好,峰纯度较高. 4.2 咖啡因标准溶液重现性分析结果 The world leader in serving science 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 -100

125 250

375 500

700 1 -

201307 #5 [modified by LLiu]

125 UV_VIS_1

2 -

201307 #6

125 UV_VIS_1

3 -

201307 #7

125 UV_VIS_1

4 -

201307 #8

125 UV_VIS_1

5 -

201307 #9

125 UV_VIS_1

6 -

201307 #10

125 UV_VIS_1 mAU min

6 5

4 3

2 1

1 - 咖啡因 - 5.867 WVL:274 nm 图4标准溶液重现性分析图(浓度为 125ug/ml,n=6) 表2标准溶液重现性分析结果(浓度为 125ug/ml,n=6) Sample Sample Name Ret.Time min Area mAU*min Plates (EP)