PDF《ICS 11.080》

5 评价方法 5.1 抑菌效果 5.1.1 悬液定量抑菌试验 5.1.1.1 适用范围 适用于液体抑菌制剂如卫生洗液、抑菌喷雾剂等对微生物抑菌效果的测定. 5.1.1.2 试剂、培养基及器材 5.1.1.2.1 试验菌株 金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌(ATCC 10231)及根据抑菌剂特 定用途所用的其他菌株. 5.1.1.2.2 试剂 稀释液: 0.03 mol/L 磷酸盐缓冲液(PBS)(pH7.2~7.4),培养基:金黄色葡萄球菌和大肠杆 菌的培养使用营养琼脂培养基,白色念珠菌的培养使用沙氏琼脂培养基. 5.1.1.2.3 器材 恒温水浴箱、计时器、Ⅱ级生物安全柜等. 5.1.1.3 试验步骤 WS/T 650―2019

3 取试验菌24h新鲜斜面培养物用PBS洗下,用PBS稀释至约5.0*10

5 CFU/mL~4.5*10

6 CFU/mL菌悬液 备用.取无菌试管,先加入5.0 mL样品(根据使用说明书要求使用原液或稀释液),置20℃±1℃ 水浴 中5min后,再加入0.1 mL试验用菌悬液,迅速混匀并立即计时.待试验菌与样品相互作用至说明书的规 定时间,分别吸取1.0 mL试验菌与样品混合液接种2个平皿,倾注培养基.菌量无法计数时,以PBS做10 倍系列稀释,选适宜稀释度分别吸取1.0 mL接种2个平皿,做活菌培养计数.同时用PBS代替样品,进行 平行试验,作为阳性对照.阳性对照回收菌落数在1.0*10

4 CFU/mL~9.0*10

4 CFU/mL之间.取同批次 PBS、培养基作阴性对照.所有试验样本和对照样本均在36℃±1℃培养,细菌繁殖体培养48h观察最终 结果;

白色念珠菌培养72h观察最终结果.试验重复3次,计算抑菌率. 5.1.1.4 抑菌率计算 1) 式中: X―抑菌率,%;

A0―阳性对照组回收菌量,单位为 CFU/mL;

A1―试验组回收菌量,单位为 CFU/mL. 5.1.1.5 结果判定 抑菌率≥50%~90%,判有抑菌作用;

抑菌率≥90%,判有较强抑菌作用. 5.1.2 载体浸泡定量抑菌试验 5.1.2.1 适用范围 适用于膏体或半固体凝胶类、黏稠状抑菌产品对微生物抑菌效果的测定. 5.1.2.2 试剂、培养基及器材 载体为10 mm*10 mm脱脂白平纹布片,脱脂方法依照《消毒技术规范》(2002版)进行,使用前压 力蒸汽灭菌备用,电子天平(d=0.01g),其它同5.1.1.2. 5.1.2.3 操作步骤 取试验菌24h新鲜斜面培养物用PBS洗下,用PBS稀释至约5.0*10

6 CFU/mL~5.0*10

7 CFU/mL制成菌 悬液备用.用微量移液器滴染10 μl菌悬液于灭菌载体上,36℃±1℃烘干或室温晾干备用. 按5 g/片的量称取样品于无菌平皿内,置20℃±1℃水浴5min,用无菌镊子取染菌载体,使载体完 全浸没于样品中, 立即计时. 待染菌载体与样品相互作用至说明书的规定时间, 分别取染菌载体加入5.0 mLPBS试管中,混匀,振荡,将试验菌洗下,分别吸取1.0 mL样液,按活菌培养计数方法测定存活菌数, 每管样液接种2个平皿.如平板上生长的菌落数较多时,可用PBS进行10倍系列稀释后,再进行活菌培养 计数.取10.0 g与试验样品同质材料不含抑菌成分的对照样品浸泡2片染菌载体进行平行试验,作为阳 性对照.阳性对照回收菌量为1.0*10

4 CFU/片~9.0*10

4 CFU/片.取同批次PBS、培养基作阴性对照. 所有试验样本和对照样本均在36℃±1℃培养,细菌繁殖体培养48h观察结果;

白色念珠菌培养72h观察 结果.试验重复3次,计算抑菌率. 5.1.2.4 抑菌率计算 WS/T 650―2019

4 2) 式中: X―抑菌率,%;

A0―对照样品的平均菌落数,单位为 CFU/片;

A1―被试样品平均菌落数,单位为 CFU/片. 5.1.2.5 结果判定 抑菌率≥50%~90%,判有抑菌作用;