PDF《培养操作及注意事项说明》

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115 号2号楼 培养操作及注意事项说明

一、细胞名称:SH-SY5Y;

人神经母细胞瘤细胞

二、生长特性: 贴壁/悬浮混合 悬浮 半悬浮半贴壁

三、细胞生长条件: 培养条件 DMEM+10%FBS 温度 37℃ 空气条件 5% CO2,,

95% AIR 传代方法 1:2-1:3 传代,2 天换液

1 次 背景资料;

该细胞系来源于

1970 年建立的一神经母细胞瘤患者的转移骨瘤灶细胞 SK-N-SH 经三次克隆后的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y).该细胞显示中等水平的多巴胺- β-羟基酶活性. SH-SY5Y 细胞的生长密度可高达 1X106 细胞/cm2,生长成悬浮和贴壁混合 生长,有的聚集成细胞丛.

四、细胞收到后处理 细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法. 收到细胞回到自己的实验室后, 先打开外包装, 用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内, 严格无菌操作.镜下观察:未超过 80%汇合度时,可将瓶装的完全培养液移入废液缸中,原瓶(T25 瓶)保留 6-8ml 完全培养液,悬浮细胞需离心处理,放入 37℃、5%CO2 孵箱培养;

超过 80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤.

五、细胞培养步骤 1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入 5mL 培养基 混合均匀.在1000RPM 条件下离心

5 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养基后吹匀.然后将 所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入 6cm 皿中,加入约 6ml 培养基,培 养过夜).第二天换液并检查细胞密度. 2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养.

1、贴壁细胞,传代参考如下: ①. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次. ②. 加2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻 敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化. ③. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM 条件下离心

5 分钟,弃去上清 上海名劲生物科技有限公司 E-mail:[email protected] website:http://www.mjswkj.cn 张丽:13764978708 上海名劲生物科技有限公司 地址:上海闵行新骏环路

115 号2号楼 液,补加 1-2mL 培养液后吹匀. ④. 将细胞悬液按 1:2 到1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中.

2、悬浮细胞,传代参考如下: 方法①:收集细胞,1000RPM 条件下离心

5 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀, 将细胞悬液按 1:2 到1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中. 方法②:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按 1:2 到1:3 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中. 3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存.贴壁细胞冻存时,弃去培养基后 加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000RPM 条件下离心

5 分钟,去除上清, 按冻存数量加入血清及 DMSO,冻存比例为 90%FBS+10%DMSO. 刚收到细胞时,胎牛血清可以用 15%培养两三天,利于细胞尽快恢复状态,细胞稳定后 再调回 10%即可 收到细胞后如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理.当天 及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要参考依据,请您务必重视.