PDF《负压屏障设施动物饲养笼具的选择及其感染 风险的识别》

Animal experiments;

Infection risk;

Sealed cage 动物病原感染性实验为了防止生物安全风险, 需要在特定的实验环境中进行,其中对设施最基本 的要求包括实验室与外周环境的压力梯度等[1] . 我国《实验室生物安全通用要求》 根据所操作生物 因子所采取的防护措施进行分级,并根据实验室活 动差异、个体防护装备和基础设施水平等对实验室 进行区分,其中符合 4? 4?

2 的实验室,可有效利用安 全隔离装置操作常规量经空气传播的致病性生物 因子[2] . 在实验动物饲养笼具的选择上,可以利用 负压动物笼具等作为安全隔离装置. 目前啮齿类 动物的感染性研究多使用 IVC(独立送风笼架具)进 行饲养,而业界对于此类设备的技术指标的要求以 及安全性仍存在质疑. 因此本文拟使用开放笼盒 和密闭笼盒对指示微生物的扩散情况进行此类测 试. 在感染性动物实验过程中啮齿类动物的饲养 主要涉及动物笼具更换,此过程需要在生物安全柜 或类似设备内进行. 因此本文对此操作存在的可 能风险进行了模拟检测. 本研究选用大肠杆菌抗性菌做指示微生物. 大肠杆菌为环境中常见微生物,自然环境中生存能 力较强,可以作为指示微生物[3] . 为了排除自然环 境中大肠杆菌等微生物对于实验的影响,本研究采 用具有卡那霉素抗性基因的基因工程菌作为指示 微生物.

1 材料和方法 1?

1 指示微生物的制备和模拟感染材料的制备 选择转化质粒 pET?28a 的大肠杆菌 E. coli 的基 因工程菌株 DH5α 为指示菌. 该菌使用含有

50 μg / mL 卡那霉素(Kan + ) 的LB 培养基进行过夜培 养,培养物浓度达到

109 / mL(稀释法测定),该指示 菌使用固体 LB 平板进行计数检测. 对指示菌的 Kan 标记进行核酸检测方法检测,指示微生物使用 核酸检测方法的检测灵敏度与固体平板培养计数 法接近(数据未展示),本研........