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1 植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒产品说明书 主要用途 植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过显色染料茚三酮与游离氨基酸的氨基发生反应, 在热处理下,产生蓝色复合物,由分光光度仪比色分析,定量检测样品中游离氨基酸含量的权威而经典的 技术方法.

该技术经过精心设计、成功实验证明的.适用于各种植物组织,包括种子(seed) 、叶片(leaf) 、 根(root)等裂解悬液样品的游离氨基酸含量检测.产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,检测 准确. 技术背景 氨基酸(amino acid或α-amino acid)是一种含有胺和羧基功能基团的分子,为生物体中最必须的元素.根 据其侧链的不同,分成四类(弱酸、弱碱、极性、非极性)和20种各种不同的氨基酸;

根据其光学异构体 (optical isomers) ,又分成L型和D型.L-氨基酸是构成蛋白质的主要结构分子.氨基酸是多肽、蛋白质和 辅酶等的组成单位,具有各种代谢作用和营养价值.基于游离氨基酸的游离氨基与茚三酮(ninhydrin)反应,产生中间产物酮酸(keto acid)和氨分子,进而在热处理下,进行脱羧基过程(仅发生于游离氨基酸) , 同时产生蓝色复合物,在分光光度仪(570nm波长)下,呈现吸光峰值的变化,来定量分析游离氨基酸的 总含量.其反应系统如下: 产品内容 清理液(Reagent A) 毫升 萃取液(Reagent B) 毫升 缓冲液(Reagent C) 毫升 反应液(Reagent D) 毫升 标准液(Reagent E) 微升 产品说明书

1 份 保存方式 保存 萃取液(Reagent B)和 标准液(Reagent E)在-20℃冰箱里;

其余的保存在 4℃冰箱里;

反应液 (Reagent D)具有挥发性,严格密闭瓶盖,避免光照;

有效保证

6 月 用户自备 1.5 毫升离心管:用于标准液配制和样品操作的容器

15 毫升锥形离心管:用于样品操作的容器 干式恒温仪:用于反应孵育 DOUNCE 匀浆器:用于裂解组织 微型台式离心机:用于样品操作 比色皿:用于比色分析的容器 分光光度仪:用于比色分析

2 实验步骤

一、样品准备 1. 准备好新鲜的植物组织(叶片、谷粒、种子等) ,并秤重以确定

1 克组织重量 2. (选择步骤)放进预冷的

15 毫升锥形离心管 3. (选择步骤)加入 xx 毫升 清理液(Reagent A)清洗

1 次4. 即刻用刀片切碎组织 5. 放进一个预冷的

15 毫升锥形离心管 6. 加入预冷的 xx 毫升 萃取液(Reagent B) 7. 涡旋震荡

5 秒,充分混匀 8. 即刻放进预冷的 DOUNCE 匀浆器,在冰槽里用匀浆棒匀化组织(约80 下) 9. 将所有组织匀浆物移入 1.5 毫升离心管,放进 4℃微型台式离心机离心

10 分钟,速度为 5000g(或7500RPM,例如 eppendorf 5415) 10.小心移出上清液(注意:不要触碰沉淀物)到另一个新的预冷的 1.5 毫升离心管 11.(选择步骤)如果上清液含有肉眼可见的残渣,重复离心

5 分钟一次,速度为 5000g(或7500RPM, 例如 eppendorf 5415) 12.移取

10 微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒- 30030.1) 13.放进-70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用

二、标准样品配制 1. 准备好

5 个1.5 毫升离心管,标记为

1 至5号管 2. 分别加入 xx 微升 缓冲液(Reagent C)到1至5号管 3. 移取 xx 微升 标准液(Reagent E)到1号管,混匀 4. 小心移取 xx 微升

1 号管稀释的 标准液(Reagent E)到2号管,混匀 5. 小心移取 xx 微升

2 号管稀释的 标准液(Reagent E)到3号管,混匀 6. 小心移取 xx 微升