PDF《流行性出血 热冻干致敏人。型 血球》

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l ogi za Si ai z a 流行性 出血热冻干致敏人.型血 球 的研 制及其应用董关 木 刘文雪 俞 永新 ( 中 国药 品生 豺削 品检 定所 北京)提要本文应用致敏的人O垄 血 球研 究反 向 间接 血凝(RP HA )和反向间接血凝抑制(RP HI ) ¨ 方法用以检测流行性出血热抗原抗体,并 试验成功用pH9 . 0硼酸盐水制各灭活鼠脑 病毒液作为 抗原.为抗原制各提供了一种简便的方法.以上 RP HA 法用于检测组织培养内病毒与用 荧光法捡涮细胞内病 毒抗原法结果一致 , 用RP HI 检 测病 人血请抗体效价,特异性高.敏 感性与IFA相同.该致敏血球和抗原是冻干制品.稳 定性好.使 用方便,是一种代替 荧光检测病 毒抗原和抗体的良好 制品.关键调:流行性出血热,致 敏人O型血球自从南 朝鲜 李镐汪 首次 分离到 流行 性 出血热 病毒 ( E H F V ) t ", 世界各国检 测EHF抗原和 抗体主 要采 用免疫 荧光( I F A) 和酶 联免 疫法( EL I S A ) .但 这些方 法较复杂 且需 要较昂贵 的仪器 谚备 ,实验 条件 要求 较高. 国 外有 人用 小 鼠免 疫腹 水及其球 蛋 白致敏 羊血 球检 弼 立谷热和 克里来 亚一 刚果 出血热 病毒 抗原和 抗体 获得 敏感 、简单 、快速 的满 意结 果【|】.近来 国 内亦 有人用 单克隆抗 体 致敏 羊血 球检 测EHFV抗原 和抗体 , 获得 同样满 意 的结 果"】 . 我们 研制 了冻干 致敏A O血球 , 以期进一 步 提高特 异性 和敏感性,并对抗原 的制 备方法 进行 了简化 .在实际应 用上取得 较满 意 的结果 . 材料 与方 法一毫t人O型缸组职链隶 人O红细胞,用 l孵戍 二硅和甲硅 经双硅化后制各成 l

0 孵硅化细胞E盯.致敏前用l/2万的辑陵辑化双醛化的血球. 用生理盐术洗涤三 次 .并 用生 理盐水恢复到l

0 孵血 球备 用. 职兔抗EHF V ( 掏i)株血请 经三次饱和硫 酸铵和DEAE层析 提纯后的IgG备用.将纯化后IgG适当稀 释 ,按 l体积IgG和 l体积2孵血 球混合,3

7 ℃ 孵育40分 钟 ,然 后用 含 l孵 兔血蒲盐术洗涤= 蒎 .最终 将血球稀释成1孵浓 度 .加 最终 含量为=千分之一 浓度的福尔马林,最 后将 血 球分 射以澈体形式或冻干保存.=.E HF A 抗曩 一直接将感染小 鼠鼠脑 用三种不同稀释澈 ( p H

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七愿 量 固定

4 . 每试验前,口RP HA洼浦定・,RP HA 抗原制备方法的改 进.以三 种不同稀释陂研磨AI 6株感染的鼠脑,稀释制备 为10一病毒悬 液.将lO一:悬液分 为份,一份低速离心后取 上清为 抗躁, 另一一 份汹融三 次(一6

0 C)后再离心取一清为抗腻.三种不同稀释液制备的份上清抗蕊的效价地裘 1. 裹1 . 不 同稀 释灌 向方法 鲁的 ^l

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