PDF《1. 处理材料》

产品简介 本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取多种细胞 中的基因组DNA.

离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附 DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物.提取的基因组DNA片段大,纯度 高,质量稳定可靠. 使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、 Southern杂交等实验. 提取得率 材料 提取量 DNA得量 哺乳动物全血 100-400 μl 3-10 μg 禽类、两栖类全血 5-20 μl 5-40 μg 动物细胞培养液

106 -107 cells 5-30 μg 动物组织

30 mg 10-30 μg 产品特点: 简单快速:1 h内即可获得超纯的基因组DNA. 广泛:适用于血液、多种动物细胞和动物组织等. 超纯:获得的DNA纯度高,可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验. 注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项. 1.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇. 2.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降. 3.若缓冲液GA或GB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用. 4.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心. 操作步骤 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签. 1. 处理材料 a. 如提取材料为血液,可直接使用200 μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液,不足200 μl 可加缓冲液GA补足;

注意:如需处理更大体积血液,如300 μl-1 ml,应按以下步骤操作:在样品中加入 3倍体积红细胞裂解液 (例如,300 μl血液加入900 μl红细胞裂解液),颠倒混匀, 室温放置5 min,期间再颠倒混匀几次.10000 rpm(~11,500*g)离心1 min(若离心 机最高转速不允许,可3000 rpm(~3,400*g)离心5 min),吸去上清,留下白细胞沉 淀,加200 μl缓冲液GA,振荡至彻底混匀. 红细胞裂解液本公司另外有售(目录号:RT122),可根据需要来决定购买. b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细 胞,因此处理量5-20 μl,可加缓冲液GA补足200 μl后进行下面的裂解步骤. c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液,然后10,000 rpm(~11,200*g)离心1 min,倒尽 上清,加200 μl缓冲液GA,振荡至彻底悬浮;

d. 动物组织(脾组织用量应少10 mg)应先打碎处理为细胞悬液,然后10,000 rpm(~11,200*g)离心1 min,倒尽上清,加200 μl缓冲液GA,振荡至彻底悬浮. 注意:如果需要去除RNA,可加入4 μl RNaseA(100 mg/ml)溶液(客户自备,目录 号:RT405-12),振荡15 sec,室温放置5 min. 2. 加入20 μl Proteinase K溶液,混匀. a. 提取血液基因组时,只需加入Proteinase K混匀,即可继续进行下一步. b. 提取细胞基因组时,只需加入Proteinase K混匀,即可继续进行下一步. c. 提取组织基因组时,加入Proteinase K混匀后,在56℃放置,直至组织溶解,简短离 心以去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤. 注意:不同组织裂解时间不同,通常需1-3 h即可完成(鼠尾需要消化过夜).不会影响 后续操作.每小时颠倒混合样品2-3次,用水浴振荡器也可. Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 本产品仅供科研使用.请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途. 3. 加入200 μl缓冲液GB,充分颠倒混匀,70℃放置10 min,溶液应变清亮,简短离心以去 除管盖内壁的水珠. 注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实 验.如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯.当血液体积≤200 μl且没有采用红细胞裂解处理,或是样本储存条件不佳,水浴后颜 色可能为深褐色,注意溶液中没有团块等沉淀. 4. 加人200 μl 无水乙醇,充分振荡混匀15 sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去 除管盖内壁的水珠. 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中), 12,000 rpm (~13,400*g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中. 6. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400*g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中. 7. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇), 12,000 rpm (~13,400*g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中. 8. 重复操作步骤7. 9. 将吸附柱CB3放回收集管中,12,000 rpm(~13,400*g)离心2 min,倒掉废液.将吸附柱 CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液. 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续 的酶反应(酶切、PCR等)实验. 10. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓 冲液TE,室温放置2-5 min,12,000 rpm (~13,400*g)离心