PDF《菜豆根瘤菌对土壤无机磷的活化释放作用*》

7 株菜豆根瘤菌,研究了其对紫色土无机磷 的溶解作用,目的是探索根瘤菌改善菜豆磷素营养 的可能机理,多方面了解其生物学功能. 1摇 材料与方法 1郾 1摇 供试材料 菜豆根瘤菌[Rhizobium sp郾(Phaseolus)] 保存 于西南大学资源环境学院微生物实验室,菌株是从 菜豆属菜豆[Phaseolus vulgaris Linn郾 ]植物根际周围

5 期摇摇张摇 亮等: 菜豆根瘤菌对土壤无机磷的活化释放作用

997 摇摇分离获取. 取其中的

7 株为供试菌株,分别编号为 R -

1、R -

2、R -

3、R -

4、R -

5、R -

6 和R-7. 先 将根 瘤菌固体培养基蒸汽灭菌(121益±1益,

30 min),冷却后分别接种供试菌株,30益±1益 斜面 培养

4 d. 培养基组成为:蒸馏水

1 000 ml、琼脂20 g、 甘露醇

10 g、酵母粉 1郾0g、KH2 PO4 0郾5g、MgSO4 ・ 7H2 O 0郾2g、NaCl 0郾1g、CaCl2 ・6H2 O 0郾1g、微量元 素液

4 ml( 每1000 ml 含H3 BO3 5郾0g,Na2 MoO4 5郾0g,dH2 O)、pH 6郾8~7郾 2. 然后,再接种至盛有

50 ml(KCl 代替 KH2 PO4 ) 的根瘤菌液体培养基中, 摇床培养(28益±1益、128 rmin -

1 )3 d 备用. 供试土壤为侏罗纪紫色砂泥岩发育的灰棕紫泥. 蒸汽灭菌后的土壤 pH 6郾

15、有机质 14郾96 g kg -

1 、全氮1郾

07 g kg -

1 、全磷 0郾89 g kg -

1 、全钾 16郾32 g kg -

1 、 铝磷 70郾36 滋g g -

1 、铁磷 29郾87 滋g g -

1 、闭蓄态磷214郾8滋g g -

1 、 钙磷279郾0滋g g -

1 、 有效磷20郾01 mg kg -

1 、速效钾92郾59 mg kg -

1 . 风干土壤,磨 细过

100 目筛,取 1郾

000 0 g 土壤置于两端开口的直 径为1 cm的塑料管中部,然后两端塞入玻璃纤维,将 土壤夹在中间,再用微孔滤膜(孔径 0郾22 滋m)密封两 端,121益蒸汽灭

150 min 备用. 在振荡培养根瘤菌 时,将盛有土壤的塑料管放入液体培养基中,水分子、 无机离子、低分子有机酸等均可顺利进出与土壤接 触,而土壤又不会穿过玻璃纤维和滤膜而进入溶液, 根瘤菌亦不能穿过玻璃纤维和滤膜进入土壤中. 1郾 2摇 试验设计 取250 ml 三角瓶,加入

50 ml KCl 代替 KH2 PO4 的根 瘤菌液体培养基, 蒸汽灭菌(121益±1益,

30 min),冷却. 接入

1 ml1郾1节中制备的菌悬液, 再加

1 个装有土壤的灭菌塑料管;

不接种的液体培 养基为对照,余同接种处理,重复

6 次. 摇瓶培养 (28益±1益、128 r min -

1 )7 d,备测有关项. 1郾 3摇 测定项目与方法 将液体培养基摇匀,用PHS鄄3C 精密酸度计测 定pH;

取10 ml 液体培养基用 H2 SO4 鄄H2 O2 消化,钼 蓝比色法测定消化液的含磷量;

另取

20 ml 将液体 培养基于

10 000 r min -

1 离心

8 min,钼蓝比色法测 定上清液的无机磷含量. 利用高效液相色谱仪( 日本 HITACHI 公司生 产)测定液体培养基中的有机酸含量. 色谱条件 为:Diode Array L鄄7455 紫外检测器,Ion鄄300 有机酸 分析专用柱 (Phenomenex, Torrance, CA, USA),流 动相:2郾5mmol L -

1 硫酸,流速:0郾5ml min -

1 ,进样 量:20 滋l 样液( 样液先经硫酸酸化),紫外检测波 长:210 nm,柱温:35益,压力:450 psi. 测定的有机 酸包括草酸、柠檬酸、苹果酸、丁二酸、乳酸、甲酸、 乙酸, 其出峰时间依次为9郾

20、 10郾

83、 14郾

06、 15郾

36、17郾

03、18郾

09、19郾65 min(图1). 图 1摇 有机酸的标准色谱图 Fig郾 1摇 Standard chromatogram of organic acids 摇摇从塑料管中取出土壤,风干后用 Olsen 法提取, 钼蓝比色法测定土壤中的有效磷含量[12] ;