PDF《的研究1》

20 分钟 后再抽针缝合. 3.行为轨迹分析:在术后各时间点记录大鼠行为轨迹.将大鼠放置于相同的无盖盒子 内(30cm*30cm),用SONY 数码摄像机从盒子上方记录大鼠在

30 分钟内的活动情况, 通过动物行为轨迹分析软件(EthoVision,V3.1,Noldus 公司)测得大鼠

30 分钟内在盒子内 的运动距离和平均速度. 4.免疫组织化学染色:大鼠麻醉后先经左心室灌注 200-250ml 生理盐水,接着灌注预 冷(4℃)4%多聚甲醛 400ml(PH 7.4),灌注速度先快后慢,随后取出脑组织放入 4%的 多聚甲醛溶液中后固定 4℃保存,24h 后放入含 30%蔗糖的 0.1MPB 溶液中,待其完全沉 底后用冰冻切片机连续冠状切片(厚度 60?m).从第三脑神经平面开始留取黑质切片,每6个切片取一张为一组,分别进行 TH、OX-42 染色.免疫组织化学染色主要步骤为:切片 入3% H2O2 室温 10min,消除内源性过氧化物酶的活性,5%正常羊血清封闭 30min,分别 加入一抗 TH(1

5000 ∶ ) 、 OX-42(1

2000 ∶ ), 阴性对照不加入一抗, 室温孵育过夜,1:300 生物素标记的二抗室温孵育 2-3h,1:300 辣根酶标记的链酶卵白素三抗室温孵育 2-3h,二 氨基联苯胺(DAB)显色,显微镜下控制显色,显色满意后,中止显色,常规脱水,透明, 封固.显微镜下观察.阴性对照脑片显微镜下观察未见阳性细胞.采用 Leica Qwin 图像分 析系统进行黑质 TH 阳性细胞计数. 5.统计学分析:数据以均数标准差(x±s)表示,采用 SPSS11.5 统计软件处理全部数 据.采用单因素方差分析进行组间比较,如组间比较有意义即采用 q 检验法进行组内两两 比较. 3. 结果 3.1 大鼠行为学观察 10?gLPS 组各时间点的平均运动速度与对照组相比, 均无统计学意义. 25?gLPS 注射后 12W、16W、20W、24W 平均运动速度与对照组相比分别降低了 46.1%(P