PDF《Pfu DNA聚合酶》

Robustnique Pfu DNA聚合酶 概述:Pfu DNA聚合酶是从克隆有Pyrococcus furiosus DNA聚合酶基因的大肠杆菌中分离出来的.

Pfu DNA聚合酶有3?→5?外切酶的 活性,它能纠正DNA扩增过程中产生的错误,是目前已发现的所有天然耐热DNA聚合酶中出错率最低的(1) . 来源:E.coli菌株,包含有从Pyrococcus furiosus中克隆的基因(2) . 应用: 1. 常规PCR. 2. 基因的高保真PCR,克隆和表达. 3. 反转录PCR (RT-PCR). 4. 平末端PCR克隆. 5. 定点突变. 贮存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 8.2 @ 25°C),1 mM Dithiothreitol (DTT),0.1 mM EDTA,100 mM KCl,0.1% NonidetTM P-40 (NP-40) (V/V),0.1% Tween

20 (V/V),50%甘油 (V/V). 10*反应缓冲液 (包括20 mM MgSO4 ):200 mM Tris-HCl (pH 8.8 @ 25°C),100 mM (NH4 )2 SO4 ,100 mM KCl,1 mg/ml无核酸酶活性 的BSA,1% Triton X-100 (V/V),20 mM MgSO4 . 活性定义:在72°C下反应30分钟,能催化10 nmol的dNTPs聚合为多核苷酸片段的酶量定义为1个活性单位 (U). 储存温度:-20°C. 核酸外切酶活性:在50 ?l反应体系中,10 U本酶与0.2 mM dNTPs和1 ?g的Hind III消化的λDNA于37°C温育4小时,电泳条带无明显变 化. 核酸内切酶活性:在50 ?l反应体系中,10 U本酶与0.2 mM dNTPs和1 ?g的pUC19质粒于37°C温育4小时,电泳条带无明显变化. 纯度:经SDS-PAGE (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%. 质量控制检测: 天津强微特生物科技有限公司 地址:天津市滨海高新区兰苑路留学生创业园工房时代写字楼II期C座331室

电话:022-83718172 022-83718175

网址:www.robustnique.com 销售:[email protected] 技术支持:[email protected] 传真:022-83718172-610 022-83718175-610 1. Lunberg, K.S. et al. 1991. High-fidelity amplification using a thermostable DNA polymerase isolated from Pyrococcus furiosus. Gene. 108:1-6. 2. Sambrook, J. et al. 2001. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (3rd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press. 参考文献: Pfu DNA聚合酶PCR反应体系和程序: 1.

50 μl反应体系,冰上操作 10* 反应缓冲液 (包括20 mM MgSO4 ) 0.6 ml 0.6 ml 0.6 ml 0.6 ml*5 0.6 ml*5 0.6 ml*5 组分 Pfu DNA聚合酶 (2.5 U/μl) #M0011

40 μl #M0012

40 μl*5 10* 反应缓冲液 (无MgSO4 )

25 mM MgSO4 成分 10*反应缓冲液 dNTP Mix (10 mM each) 上游引物 (10 μM) 下游引物 (10 μM) DNA模板 Pfu DNA聚合酶* 水 体积 (μl)

5 μl

1 μl 0.5-5 μl 0.5-5 μl 终浓度 1*

200 μM each 0.1-1 μM 0.1-1 μM 根据具体情况添加 0.5-1 μl 补充至50 μl 1.25-2.5单位 [ *]:当微量体积的酶比较难吸取时,可将酶稀释于1*反应缓冲液中. Robustnique Pfu DNA聚合酶 天津强微特生物科技有限公司 地址:天津市滨海高新区兰苑路留学生创业园工房时代写字楼II期C座331室

电话:022-83718172 022-83718175

网址:www.robustnique.com 销售:[email protected] 技术支持:[email protected] 传真:022-83718172-610 022-83718175-610 2. 混匀并短暂离心. 如果PCR仪没有热盖功能,可在液体表面添加少许石蜡油防止蒸发. 3. PCR反应程序 步骤 预变性 25-35个循环 延伸 保存 温度 95°C 95°C Tm -5°C 72°C 72°C

4 -10°C 时间 1-3 min

30 s

30 s

2 min/kb

5 -15 min