PDF《水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法》

8 分析步骤 8.1 样品过滤 根据水样的种类判断水样过滤体积,最小过滤体积为10 ml,如过滤体积小于10 ml时应逐 级稀释.理想的水样过滤体积是滤膜上生长的粪大肠菌群菌落数为20~60个.当最小过滤体 积为10 ml时,滤膜上菌落密度仍过大,则应对水样进行稀释.参考过滤体积见表1. 表1水样过滤体积参考表 水样种类 过滤体积(ml)

10 1 0.1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 湖水、水源水 河水 生活污水 医疗机构排放污水(处理后) 畜禽养殖业等排放废水 用灭菌镊子以无菌操作夹取滤膜贴放在已灭菌的过滤装置上,固定好过滤装置,将水样 充分混匀后抽滤,以无菌水冲洗器壁2~3次.水样过滤完成后,再抽气约5 s,关上开关.

4 8.2 培养 用灭菌镊子夹取滤膜移放在MFC培养基上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培养基完全 贴紧,两者间不得留有气泡,然后将培养皿倒置,放入恒温培养箱内,44.5±0.5℃培养24±2 h. 8.3 结果判读 MFC培养基上呈蓝色或蓝绿色的菌落为粪大肠菌群菌落,予以计数. MFC培养基上呈灰色、淡黄色或无色的菌落非粪大肠菌群菌落,不予计数.

9 结果计算与表示 9.1 结果计算 计数滤膜上生长的粪大肠菌群菌落总数,按公式(1)计算1 L水样中的粪大肠菌群数: f * Q

1000 * C C

1 ? (1) 式中:C――水样中粪大肠菌群浓度,CFU/L;

C1――滤膜上生长的粪大肠菌群菌落总数,个;

1000――将过滤体积的单位由ml转换为L;

Q――水样过滤体积,ml;

f――水样稀释倍数. 9.2 结果表示 测定结果保留两位有效数字,大于等于100时以科学计数法表示,结果的单位为CFU/L. 平均值以几何平均计算.若要报出"未检出"时,过滤体积至少应为100 ml.

10 精密度和准确度 10.1 精密度 6个实验室对低浓度 (约5.0*102 CFU/L) 、 中浓度 (约3.0*105 CFU/L) 和高浓度 (约5.0*106 CFU/L)三个不同浓度粪大肠菌群的实际水样和有证标准样品(浓度为3670 MPN/L,可接受 范围为330~7710 MPN/L)进行了测定,实验室内相对标准偏差范围分别为5.3%~12%、 0.81%~2.1%、0.51%~4.2%和7.7%~9.8%;

实验室间相对标准偏差分别为6.8%,3.9%,4.0% 和3.62%;

实验室间95%置信区间见表2.

5 表2实验室间 95%置信区间 低浓度(CFU/L) 中浓度(CFU/L) 高浓度(CFU/L) 标准样品(CFU/L) 均值 95%置信 区间 均值 95%置信 区间 均值 95%置信 区间 均值 95%置信 区间 2.0*102 1.4*102 ~ 2.9*102 1.6*105 9.8*104 ~ 2.6*105 1.6*107 8.2*106 ~ 3.0*107 6.1*102 3.8*102 ~ 9.9*102 10.2 准确度 6个实验室对含粪大肠菌群浓度为3670 MPN/L(370~7710 MPN/L)的标准样品进行了测 定,相对误差范围为-19%~-32%;

相对误差最终值为:-23%±10%. 注:微生物检测数据为偏态分布,其测定结果全部经以

10 为底对数转换后进行计算.

11 质量保证和质量控制 11.1 培养基检验 更换不同批次培养基时要进行阳性和阴性菌株检验,以确保其符合要求. 11.2 培养基保存 配制好的培养基不宜保存过久,不能进行多次融化操作,以少量勤配为宜.存放时应避 免阳光直射,并且要避免杂菌侵入和水分蒸发.当培养基颜色变化,或脱水明显时应废弃不 用. 11.3 空白试验 每次试验都要用无菌水做实验室空白测定, 培养后的滤膜上不得有任何菌落生长. 否则, 该次样品测定结果无效,应查明原因后重新测定. 11.4 阳性及阴性对照 粪大肠菌群测定的阳性菌株(如大肠埃希氏菌 Escherichia coli) ,阴性菌株(如产气肠 杆菌 Enterobacter aerogenes) .将标准菌株配成适宜浓度,按"8.1 样品过滤"要求使滤膜 上生长的菌落数为 20~60 个,然后按"8.2 培养"要求培养,阳性菌株应生长为蓝色或蓝 绿色菌落,阴性菌株应生长为灰色、淡黄色、无色或无菌落生长.否则,该次样品测定结果 无效,应查明原因后重新测定.