PDF《PCR仪比较： ProFlex 96孔PCR系统》

应用说明2 ProFlex 96孔PCR系统 简介: GeneAmp? PCR系统9700于1997年问世, 曾被大量文献引用过 (~3,000篇文献),享有 极高的声誉,是一款精确且可靠的PCR仪.

本研究将几款PCR仪与GeneAmp PCR系统 9700相比较,包括: ? ProFlex? 96孔PCR系统 ? Bio-Rad? C1000 Touch? 96孔PCR仪?MJ Research PTC-200 96孔PCR仪?Eppendorf? Mastercycler? Pro S PCR仪比较: ProFlex 96孔PCR系统 具有稳定且可靠的性能 材料与方法 采用图1和图2所示的试剂和扩增程序检测两种PCR模板 (0.9 kb和3 kb). 使用含SYBR Safe DNA凝胶染料的E-Gel琼脂糖凝胶 套装,1.2% (货号:G620601)和TrackIt?

1 Kb Plus DNA分子量标准(货号:10488085)用于PCR产物电 泳.为说明加热模块中的差异,按图3所示放置PCR 反应管,H11位置为阴性对照孔. 95?C 01:00 00:30 01:00 10:00 94?C 72?C 00:30 x30 cycles 55?C 72?C ∞ 4?C 95?C 01:00 00:30 03:00 10:00 94?C 68?C 00:30 x30 cycles 55?C 68?C ∞ 4?C 95?C 01:00 00:30 01:00 10:00 94?C 72?C 00:30 x30 cycles 55?C 72?C ∞ 4?C 95?C 01:00 00:30 03:00 10:00 94?C 68?C 00:30 x30 cycles 55?C 68?C ∞ 4?C 图1. 用于0.9 kb模板的PCR反应组分和循环条件. 图2. 用于3 kb模板的PCR反应组分和循环条件. 产品 单位反应体积 (μL) 货号 Platinum PCR SuperMix 46.0

11306016 正向引物 (100 pmol/μL) 0.5 A15612 反向引物 (100 pmol/μL) 0.5 A15612 DNA模板 (50 ng质粒) 1.0 NA UltraPure无DNA酶/无RNA酶蒸馏水 2.0

10977015 产品 单位反应体积 (μL) 货号 Platinum高保真PCR SuperMix 46.0

12532016 正向引物 (100 pmol/μL) 0.5 A15612 反向引物 (100 pmol/μL) 0.5 A15612 DNA模板 (50 ng质粒) 1.0 NA UltraPure 无DNA酶/无RNA酶蒸馏水 2.0

10977015 图3. 加热模块中的PCR反应位置. A1 D1 H1 A6 D6 H6 A12 D12 H12 C CTL 图4. 0.9 kb模板的扩增. ProFlex? 96孔PCR系统 GeneAmp? PCR系统9700,镀金96孔MJ Research PTC-200 96孔PCR仪Bio-Rad? C1000 Touch? 96孔PCR仪Eppendorf? Mastercycler? Pro S ProFlex? 96孔PCR系统 GeneAmp? PCR系统9700,镀金96孔MJ Research PTC-200 96孔PCR仪Bio-Rad? C1000 Touch? 96孔PCR仪Eppendorf? Mastercycler? Pro S 图5.

3 kb模板的扩增. 结果 在五种仪器上对0.9 kb模板进行PCR扩增,结果相当(图4).五种仪器的产量无明显差异.在所有检测孔中, 每种仪器生成的PCR产物大小均正确.但是,对于3 kb模板(图5),Bio-Rad C1000 Touch? PCR仪表现出位 置差异. 结论 ProFlex PCR系统的产量与成熟且可靠的GeneAmp? PCR系统9700相当.这些系统未观察到明显的孔间差 异,而采用Bio-Rad C1000 Touch PCR仪检测3 kb模板的差异较大.上述结果具有分析特异性,具体取决于 PCR实验条件. 仪器参数 GeneAmp PCR系统9700 ProFlex PCR系统 Bio-Rad C1000 Touch PCR仪Eppendorf Mastercycler Pro S 可选模块 ?

1 x 96孔, 0.2 mL;

?

1 x 60孔, 0.5 mL;

?

2 x 96孔, 0.2 mL;

?

2 x 384孔, 0.02 mL;

? 适用于芯片的双槽式加热模块;

?

3 x 32孔独立控制;

?

1 x 96孔VeriFlex加热模块;

?

2 x 96孔;

?

2 x 384孔;

? 适用于芯片的双槽式加热模块;

?

1 x 96孔, 0.2 mL;

?

1 x 96深孔;

?

2 x 48孔, 0.2 mL;

?

1 x 384孔?1x96孔, 0.2 ml;

?

1 x 384孔 最大模块变温速率, °C/秒2.6°C/秒 (镀金加热模块) 6°C/秒5°C/秒约6°C/秒 最大样本变温速率, °C/秒2.3°C/秒 (镀金加热模块;

1 μL样 本体积) 4.4°C/秒(1 μL样本体积) 未公布 未公布 温度范围 4C99°C 0C100°C 0C100°C 4C99°C 温度准确度 ±0.25°C (35C99.9°C) ±0.25°C (35C99.9°C) ±0.2°C (90°C下预设目标 温度) ±0.2°C 温度均一性 ±0.5°C (达到95°C后30秒) 1000种实验方案 USB, 机载>1000种实验 方案 未公布 尺寸 (W x D x H)