PDF《超临界萃取-超临界色谱 -质谱联用（SFE-SFC-MS）检》

903 DBS 卡上,室温晾干后打孔取直径

3 mm 的 干斑置于提取器中,上样分析. Time Module Commond Value 2.00 SFE Extraction Valve Dynamic 4.00 SFE End 4.00 Pumps Pump B Conc.

10 4.01 Pumps Pump B Conc.

20 10.00 Pumps Pump B Conc.

20 18.00 Pumps Pump B Conc.

100 20.01 Pumps Pump B Conc.

100 20.01 SFE Wash 20.02 Pumps Shut Off Valve(Pump A) Close 21.99 Pumps Pump B Conc.

100 22.00 Pumps Pump B Conc.

0 22.00 Pumps Total Flow

3 22.01 Pumps Total Flow

0 22.02 Pumps Shut Off Valve(Pump A) Open 22.49 Pumps Shut Off Valve(Pump A) Open(Pump On) 22.50 SFE Extraction Valve Static 22.50 Pumps Total Flow

0 22.51 Pumps Total Flow

3 22.51 SFE Vent Valve Vent 25.50 Controller Stop ? 19? ?

2 结果与讨论 2.1 超临界萃取条件的优化 试验以萃取改性剂的用量、萃取压力和萃取温度为变量,以目标物的峰面积为评价萃取 效率的优劣. 2.1.1 萃取改性剂的选择 由于目标物质极性较大,仅使用弱极性的 CO2 很难将目标物质提取出来,因此,加入适 量的改性剂是首要选择.本试验使用甲醇作为改性剂,考察了甲醇的用量为 5%、10%和15% 对提取量的影响.结果显示 10%的用量最佳.甲醇用量与目标毒物峰面积关系如图所示. 2.1.2 萃取压力的选择 肖观秀等在研究超临界萃取生物碱时发现,适当提高萃取压力能显著提高超临界流体的 溶解能力.本试验中考察了

10 MPa、20 Mp 和30 MPa 萃取压力下,6 种毒物的峰面积.结果 发现,当萃取压力从

10 MPa 增加到

15 MPa 时,提取效率有明显的提高,所有毒物的峰面积 明显提高,有些甚至提高了 2-3 倍.当继续提高提取压力到

20 MPa 时,艾司唑仑、阿普唑仑 和三唑仑的峰面积继续增加;

而其他毒物的呈现下降趋势,不过下降的不是非常的明显. 2.1.3 萃取温度的选择 在其他条件不变情况下,考察了萃取温度对血中毒物的萃取能力.从图萃取温度对峰面积 的曲线可以看出,存在最佳的萃取温度.且,从图中明显看出,对于多数毒物,当萃取温度 ? 20? ? 达到 60℃时,峰面积最小. 2.2 MRM 色谱图

200 ng/mL 人血加标样品的色谱图如下图所示,6 种毒物得到了较好的分离.使用在线 SFE-SFC 系统,从提取到分离分析仅需要

25 分钟.大大节省了整个分析周期. 2.

3 检出限、线性范围和回收率 用所建立的方法进行了一些分析物定量分析的线性关系和回收率的考察.分别在 DBS 卡 上加入不同浓度的标准溶液进行分析,将分析物色谱峰面积比与浓度进行回归,得线性方程及 相关系数见表 3.测试

200 ng/mL 浓度的人血加标样品,平行测定

3 次,取平均值作为回收率 结果,同时计算

3 次样品的相对标准偏差作为精密度评价,以上实验结果一并列入表

3 中.根 据分析物峰高与含量成正比,计算出分析物色谱峰高相当于基线噪音强度三倍检材中分析物浓 度.各药物的检出限(S/N=3)在1~10 ng/mL 之间. 表16种常见镇静药物的线性关系和回收率 药物组分 tR (min) 线性范围 (ng/mL) 相关系数 (R2 ) LOD (ng/mL) 回收率 (%) RSD (%,n=3) 地西泮 5.338 10~500 0.994

2 99.1 13.6 硝西泮 6.458 50~1000 0.992

8 110.2 15.4 氯硝西泮 6.574 50~1000 0.996

8 94.4 20.2 艾司唑仑 9.962 10~500 0.999

1 78.0 16.7 阿普唑仑 10.828 10~500 0.996

1 107.9 18.8 三唑仑 11.733 50~1000 0.992

10 68.8 18.4 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 min

0 10000

20000 30000