PDF《Technical Manual》

概述 HilyMax Transfection Reagent 货号:H357 规格:0.

5 ml,

1 ml 试剂盒内含 操作步骤 储存条件 Technical Manual HilyMax是同仁化学研究所 (DOJINDO) 和日本福冈工业中心联合研发的一种新型阳离子脂质 体转染试剂.它以高转染率、低毒性广泛应用于多种细胞系及siRNA.同时,HilyMax转染试剂 不受培养基中血清的影响,转染过程中也不需更换培养基,操作简单.此外,由于HilyMax不含 有对转染体系产生干扰的生物成分,因而最大程度减少了对转染实验的影响. 0.5 ml: HilyMax Reagent

1 管Lipoform Buffer 0.5 ml*1

1 ml: HilyMax Reagent

1 管Lipoform Buffer 1.0 ml*1 1. 未开封的试剂盒请置于0-5℃保存. 2. 混合好的转染试剂溶液请置于-20℃保存,试剂在-20℃可以稳定保存6个月. *若使用比较频繁,请将混合好的转染试剂溶液置于0-5℃保存,并尽量在一个月内用完.若不能在一 个月内用完,建议分装后在-20℃密封保存.每次使用前建议重新用振荡器或者移液器混匀溶液. 1. 因管内HilyMax量极少,肉眼几乎无法辨别,请在开封前轻弹HilyMax Reagent管壁或适当离心以确保 粉末沉入管底. 2. 将0.5 ml 或1 ml Lipoform Buffer加入HilyMax Reagent管中,并使用振荡器震动或移液器轻轻吹1-2 min 混匀转染试剂直至完全溶解. *在亮光下检查管内溶液中是否还有不溶物,如果有的话继续使用振荡器震动直至完全溶解, 否则会影响转染实验的效果. HilyMax工作液制备 常规转染 以24孔板转染实验操作为例 (其他类型培养板请参考表1和表2): 1. 接种细胞 1) 贴壁细胞 转染实验前一天,接种细胞到24孔板,调整细胞密度为40%-90%a) ,细胞悬液b) 体积0.5 ml/孔. 2) 悬浮细胞 转染实验前一天,接种细胞到24孔板,调整细胞密度为0.1-1.6*106 cells/孔,细胞悬液b) 体积0.5 ml/孔. a) 调整细胞密度为40%-90%指孔底部被细胞覆盖面积为40%-90%. b) 细胞悬液中若含有血清,不会影响转染效果. *转染前请确认细胞状态,如果细胞状态比较差,会影响到转染效率及实验结果. 按照说明书第2页图1优化方案是转染实验获取理想结果的关键. 操作步骤 2. DNA-HilyMax复合体形成 1) 加入30 ?l无血清培 养基a) 至离心管. 2) 加入0.5-1.5 ?g质粒DNAb) 到以上离 心管中,轻柔混匀. 3) 加入HilyMax转染 试剂到以上溶液中, 轻柔混匀,DNA和HilyMax的比例c) 在1:1-1:7. 4) 室温静置15 mind) . a) 请使用不含血清和抗生素的培养基,否则会影响DNA和HilyMax复合体形成. b) 确保转染所用DNA的纯度 (A260/A280=1.7-1.9),推荐的DNA的浓度为0.15-1.00 mg/ml. c) DNA和HilyMax的比例需根据具体实验条件进行优化确定,可参考图1. d) 静置时间超过30 min可能会影响转染效果. 3. 将DNA-HilyMax复合体溶液画圈式均匀滴加入细胞悬液中,轻轻敲击24孔板帮助混匀. 4. 在37℃、CO2细胞培养箱中培养. *根据试剂对细胞毒性大小等实验情况,可在培养4-24 h内换液,或者不换液. 5. 培养24-72 h后可进行后续实验. 转染条件优化方案: 图1. 转染条件优化方案 (24孔板) 不更换培养基 转染4 h后更换培养基 细胞密度:50% 细胞密度:80% *每孔数值为HilyMax量 根据实验需求可自行调整DNA与HilyMax的比例,例如: 1:

1、1:

3、1:5或1:

2、1:

4、1:6 若使用24孔板以外培养板,请以图1中DNA以及HilyMax工作液添加量为基数,再乘以表1中列举的倍率. 表1. 不同培养板换算倍率表操作步骤 根据表1计算所得不同培养板的DNA以及HilyMax工作液添加量: