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第_

8 卷第3期1993年9月 中国病毒学ⅥR0 I X ) G I cA , ~ r NI CA f

7 (

7 .

/ V .8 No.

3 S c D | .

1 9

9 3 应用单克隆抗体免疫细胞化学法分析尸检组织中肾 综合征出血热病毒 G

2 , N P及H A结构蛋白抗原'

杨 守京 ( 】 . 第四军酞 学提要蛋白( Nl c c 日Ⅺ,NP)及血凝素( H e m a ~ u t i n i n , H A ) 抗原的单克隆抗体免疫细胞化学方法对

1 9 倒}Ⅱ尸检病例的

1 6 种组织 中的病毒抗原进行了定位和分布的研究及抗原分析. 结果表明, 死于早 期}Ⅱ人体组 织内病毒抗膝垂大 . 分布广泛 . 主要吼可溶性和颗粒性两种形式存在 一 前者存在于 细胞内和细胞外 , 呈G2,NP及 H A抗原阳性 . 是参与形成免疫复合物的主要抗原形式 { 后者是以单 纯病毒 N P或HA抗原阳性 的病毒包涵体( I B ) 形式存在于细胞内 , 是病毒直接作用所致细胞病变 的 标志 , I B的广泛分布但只有极个别阳性细胞发生坏死 , 说明该病毒具有泛 嗜性感染和弱致细胞病变 能 力的特性. 抗原分析结果显示 , 组织细胞中病毒抗原的表达及其抗原量受宿主细胞 的种属 , 组织结构特点 及病 期的 影响, 也存 在个 体差 异以 及因感染 病毒 株或血清 型 不同 产生 差 异的 可能性・ 病毒 抗原 染色 形 态学证 实,NP上 具有 H A抗原 位点 , 其抗 膝央定 簇有三 类,其中的某 些 抗原 决定簇 可 因病 毒宿 主 动物或细胞的种属不 同,表达也不 同.H A抗原 在人体组织细胞 中的高表选和 广泛分布也说明 毒及 其结 构蛋 白的抗原性分析和病 毒的分型 , 但 尚未见到用 于人 体组 织 中病毒结构 蛋 白形 态 研究和抗 原分析的报道 .作者利用 国产的

1 5株分别针对 G

2 , N P及HA抗 原的 M Ab s , 以新 建 立起来的敏感 的免疫细 胞化学方法[ 力, 分别对我 国西安 , 沈 阳及广州等地的 HF R S尸检病 例组 织 中病毒结构 蛋白进行 了定位和分布 的形态学 研究及病 毒抗原分析. 材料和方 法l材料}酮峪 尸 检共 l 9例,包括西 安地 区l7例 系 第四 军医大 学病理 教 研室 于1961~1989年 收集 } 沈 阳地 区1倒,广卅 I 地区 I 例. 其中发热期

1 例,休克期

8 例,少尿期

2 倒.多屎期

4 例,恢复期

1 倒,均为

1 0 福尔马林固 定,石蜡包埋的组织 , 共l6种,分别做

5 l m 的连续组织切片.

2 方法 多重 P A l : '

及多重 P A l : '

结合 A B C法定位分析尸检组织中病毒抗原m.抗HFRSVM A b s 共16种( 表1),做车文

1 9

9 2 年11月17日收到 +

1 9

9 3 年2月4日恪回. ・国家自然科学基盘资助项 目, N o

3 9

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0 一~~~一维普资讯 http://www.cqvip.com

2 4

4 中国病毒学第8卷l一2000稀释 , 分别单独使用. 寰L抗HFP~V革克隆 抗体的性质霞萁来潭 T曲】thech岫妇and∞ 悯M^agai|I毗HFRSV e m e d ou r S t u dy 注;

∞

9 为江西 舞鼠病毒 I ^9 为野 鼠型 ^

9 株病毒 I 耻2为家鼠皇 R

2 2株病毒i C Y a # . ~ 嘣 为从病人分离的病毒 结古活力 l 为M^s0结台病毒蛋白最大{ 盘窿( I | g / | 兀1)I抗体活性 f 为抗体一 I t 郸或血凝抑制活性滴度的倒教. 组 织脱 蜡入水 ,

0 _ l 孵孵 双氧 术处理 组织

4 0分钟 去除 其中的 内捃【 性过 氧化物酶 话性 , 抗HFKSVM^ 分别在

4 ℃孵育组织

7

2 小时 , 显示 MA 用羊抗鼠

1 B G l

3 .

0 ( 本室射备) 桥接鼠单克隆 P A P I :

1 0 ,

0 0

0 ( 武援 生物制 品研 究所). 或用 生物豪 化羊抗 鼠IsG1,1 6,

0 0 0及ABc复 合钧 1,4

0 9( A B C试剂盘 为美国 V e c t o r 公司产品) , 并重复后两步染色 , 染色

4 ~8 十pAP或 p A P +A B e不等 , 一般为

5 ~B P A P或pAP+A B C,

0 - O l D A B +

0 0

1 0

2 呈色 5分钟 . , 对l!}l阳性对照用陈株 H l 感染的 V o r o E B 细胞 ;

另外还设有正常组织对厢 , 替代对照及吸收对照. 结果l病毒抗原染色一般情况 所检的 l 9例HFRS尸病 例均为阳性 (

1 9 /

1 9 ) ( 表2).2病毒抗 原的组织 分布 及定位

5 - 、 血管 : 心肌 纤维 , 心 内膜 内皮 , 全身血管平精肌 细胞 ( 广州及部分西安病 例),小血管 壁及内皮细胞 ;

维普资讯 http://www.cqvip.com 第 3期 插守京等: 应用单克隆抗俸 中HI

0 2 . N P丑HA结构蛋白抗碍 i

2 4

5 肝:肝细胞 , 枯 否氏细胞 , 肝 窦及 胆管上皮 } 脾:淋巴细 胞,单核吞噬细胞l肺:支气管粘 膜上 皮,腺上皮 , 平 精肌 , 软骨细 胞,肺呼吸道粘膜 上皮 ;

I I型肺 上皮细 胞,肺水肿液 , 参出wB c ( 图1)}衰t尸揎组织抗 哪碰h免应绷矗化学豢色结果 协2t~u l t a l r o m 删删tr螂坤H帅椭pAP舯dP ^ P+^B c蝴注Notel1.心H嚏n2.肝u惯3.牌spl越I -

4 . 肺l,~mg乓肾K i d dy

6 . 脯7.睬垂唪 P i mi t a ~ g l a n d

8 . 扁髓俸 T 咖9.颌下辣 s u h I _ 肼d

1 0 . 甲状睬 y r 蒯11.胸睬 I'

~lUe1

2 . 胰腺P~nctem】肾上朦 A d r e n a l 山n由14.前列臃 P r 蛐Bl且nd1

5 睾丸TH16.淋巴结 柙phr幽弥j曼性阳性 D w ~ i n i n g w i e , ∞c m o r e M^ 空泡 状m阳性 V v m I B

8 山5It州1 w i t h舯e o r t r m M A b s - 囊粒 状m阳性 0m 山rvirallB嘲 i I - i l I 5呻t w- 曲帅e r r 帆M^ 一 束染 色组 织u删蜊t'

圈u 瞎(符号意 义下 同) 维普资讯 http://www.cqvip.com 2d

6 中国病毒学第8卷 圈1HFRS尸检支气管及坤组织.支气管粘膜上皮 , 脖体 . 平滑肌 . 血管壁及 wB c 呈病毒 H A抗麝 ( 阳性 (

1 a . MA b

3 0

8 - 卯^ P . X1

0 0 , : 臣有同样染色效果的 M J 还有

7 D ] .

8 期,8G2,8G3),肺呼吸性支气管粘膜上皮及脱落的上皮细牖 中HA呈 m染色形 态( z b ,

8 G

2 -

6 P ~ P , X

4 0

0 ) I 肺泡 I. I 型上皮细牖呈肩 毒mF或 H A抗原阳性 (

1 e . M^ b A

2 5 -

1 或3DS-5~AP,X40011V[A~^

3 5 , R

3 1 .

7 1 : )

1 ,

8 1 :

8 .

8 0

2 ,

8 03 具有同样染色结果) } 翥毒

0 2抗原在肺浪中渗出 的WH C呈拜漫阳性(

1 d , L V

4 $ A - S P A P , X

4 0

0 ) 或肺泡弥蘸阳性 , 在肺承胂靛中出现 G2抗原阳性空泡(

1 e . MAO L V4

8 &

-

4 pAP { -

4 ABC. X4

00 ) 瞰1Amo p s yt m n d l I Ⅱ l s H F R S B v T h e v i r a l H^ a n l i g e n Ⅷ v a d d ~ . i nb mo c ~ s a. , ~ me U m n. .S . X a n m . s mo o t hmu s c l e s , Mo o d v e s s e l s a n dWB C i n t wa l l l I m s t a i n e d MAI m瑚,7DI ,

8 F 8,

8 02 .

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1 a, MAb

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2 , N P 噩HA结构蛋白 抗原

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