PDF《犅犆犌》

第二军医大学学报

2 0

1 4年5月第3 5卷第5期: / / .

. 阕AcademicJ o u r n a l o fS e c o n dM i l i t a r yM e d i c a lU n i v e r s i t y ,M a y

2 0

1 4,V o l .

3 5,N o .

5 ・5

0 9 ・ D O I :

1 0.

3 7

2 4 / S P. J .

1 0

0 8.

2 0

1 4.

0 0

5 0

9 ・论著・ 中国汉族冠心病人群 5/8基因 4299376多态性及脂质水 平分析 胡鸣颖1,

2 , 许丽敏3 , 王春明2 , 刘艳红2 , 关艳丽2 , 徐耕1 , 段世伟3 1.浙江大学医学院附属第二医院心血管科, 杭州

3 1

0 0

0 9 2.鄞州人民医院心血管科, 宁波

3 1

5 0

4 0 3.宁波大学医学院浙江省病理生理学技术研究重点实验室, 宁波

3 1

5 2

1 1 [ 摘要] 目的 探究中国人群 5/8基因r s

4 2

9 9

3 7 6多态性与冠心病的相关性, 并对一些相关脂质和脂蛋白 水平进行研究, 探究其与冠心病的关系. 方法 收集2

9 0例冠心病、

1 9 8例非冠心病及3

3 1例健康正常人的血样, 采用核酸自 动提取仪提取基因组 D NA, M a s s A R R AY 时间飞行质谱技术分析r s

4 2

9 9

3 7 6基因型, 并测定所有研究对象血脂水平, 对比分析 各组人群基因多态性及血脂水平差异. 结果 中国人群 5/8基因r s

4 2

9 9

3 7 6多态性在冠心病组与非冠心病组以 及健康对照组之间的分布差异无统计学意义.在总体和男性患者中, 脂质水平与冠心病没有相关性;

但在女性患者中, 冠心病 患者三酰甘油( T G) 及总胆固醇( T C) 水平比非冠心病患者高, 差异有统计学意义( T G: 2.

2 3±1.

0 5v s1.

8 4±1.

0 3, =0.

0 1;

T C: 4.

7 9±1.

1 7v s4.

3 6±1.

0 3, =0.

0 1 ) .根据年龄进行分层分析, ≥6 0岁人群中, 冠心病患者高密度脂蛋白 ( HD L) 水平比 非冠心病患者低( 1.

0 9±0.

2 3v s1.

1 6±0.

2 5, =0.

0 3 ) . 结论 中国人群 5/8基因r s

4 2

9 9

3 7 6多态性与冠心病 可能关系不大;

女性冠心病患者较非冠心病患者具有更高的 T C 和TG水平,

6 0岁及以上的冠心病患者较非冠心病患者具有 更低的 HD L水平. [ 关键词] 冠心病;

A T P结合匣式转运子;

A B C G 5;

A B C G 8;

植物固醇;

脂类;

r s

4 2

9 9

3 7

6 [ 中图分类号] R5

4 1.

4 [ 文献标志码] A [ 文章编号]

0 2

5 8

8 7

9 X(

2 0

1 4 )

0 5

5 0

9

0 6 5/8 遄( 4299376)嶙樽 状 樽 镒 HU M i n g y i n g 1,

2 , X UL i m i n

3 ,WAN GC h u n m i n g

2 , L I U Y a n h o n g

2 , GUAN Y a n l i

2 , XU G e n g

1 , D UANS h i w e i

3 1.D e p a r t m e n to f C a r d i o l o g y ,S e c o n d A f f i l i a t e d H o s p i t a l ,Z h e j i a n g U n i v e r s i t y C o l l e g eo f M e d i c i n e ,H a n g z h o u

3 1

0 0

0 9, Z h e j i a n g , C h i n a 2. D e p a r t m e n to fC a r d i o l o g y , P e o p l e '

sH o s p i t a l o fY i n z h o u ,N i n g b o3

1 5

0 4 0, Z h e j i a n g , C h i n a 3. Z h e j i a n gP r o v i n c i a lK e yL a b o r a t o r yo fP a t h o p h y s i o l o g y ,N i n g b oU n i v e r s i t yS c h o o lo fM e d i c i n e ,N i n g b o3

1 5

2 1 1, Z h e j i a n g , C h i n a [ 收稿日期]

2 0

1 3

1 2

0 2 [ 接受日期]

2 0

1 4

0 3

1 0 [ 基金项目] 国家自然科学基金(

3 1

1 0

0 9

1 9,

3 0

7 7

2 1

5 5 ) . S u p p o r t e db yN a t i o n a lN a t u r a lS c i e n c eF o u n d a t i o no fC h i n a (

3 1

1 0

0 9

1 9,

3 0

7 7

2 1

5 5 ) . [ 作者简介] 胡鸣颖, 主治医师. E m a i l : s u mm e r g i r l

1 0

0 8@1

6 3. c o m;

许丽敏,硕士生. E m a i l : w e n e y

8 8

0 8

0 3@1

6 3. c o m 共同第一作者( C o f i r s t a u t h o r s ) . 通信作者( C o r r e s p o n d i n ga u t h o r s ) . T e l :

0 5

7 1

8 7

7 8

4 7

4 9 , E m a i l : x u g e n g @

2 1 c n . c o m;

T e l :

0 5

7 4

8 7

6 0

9 9

5 0 , E m a i l : d u a n s h i w e i @n b u . e d u . c n [ ]Toe x p l o r et h ea s s o c i a t i o nb e t w e e nv a r i a n tr s

4 2

9 9

3 7 6o f5/8g e n ew i t ht h er i s ko f c o r o n a r yh e a r td i s e a s e( CHD) i n H a nC h i n e s ea n dt h ea s s o c i a t i o no fr e l a t e dl i p i dl e v e l sw i t hCHD.Wec o l l e c t e d b l o o ds a m p l e s f r o m2

9 0CHDc a s e s ,

1 9 8n o n CHDc o n t r o l sa n d3

3 1h e a l t h yc o n t r o l s .T h eg e n o m i cD NA w a sa c q u i r e db yt h e n u c l e i ca c i de x t r a c t i o na u t o m a t i ca n a l y z e ra n dt h er s

4 2

9 9

3 7 6g e n o t y p e sw e r ea n a l y z e db yt h eM a s s A R R AYi P L E X R p l a t f o r m. Therew e r en os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e s i nd i s t r i b u t i o no f v a r i a n t r s

4 2

9 9

3 7 6o f5/8g e n ea m o n gH a nC h i n e s e w i t hCHD, n o n CHDc o n t r o l sa n dh e a l t h yc o n t r o l s .T h e r ew a sn oa s s o c i a t i o nb e t w e e nl i p i dl e v e l sa n dCHDi ne i t h e rt o t a lo r m a l eg r o u p s .W h i l e i n f e m a l eg r o u p , t h e t r i g l y c e r i d e( T G) a n d t o t a l c h o l e s t e r o l( T C) w e r eh i g h e r i nCHDp a t i e n t s t h a n i nn o n CHDc o n t r o l s( T G: 2.

2 3±1.

0 5v s1.

8 4±1.

0 3, =0.

0 1;

T C: 4.

7 9±1.

1 7v s4.

3 6±1.

0 3, =0.

0 1) . I tw a sa l s of o u n d t h a t , f o r t h o s e6 0y e a r so l da n da b o v e , t h eCHDc a s e sh a das i g n i f i c a n t l y l o w e rh i g hd e n s i t y l i p o p r o t e i n( HD L) l e v e l c o m p a r e d w i t hn o n CHDg r o u p( 1.

0 9±0.

2 3v s 1.

1 6±0.

2 5, =0.

0 3 ) . 镒镒Thereisn on o t i c e a b l e a s s o c i a t i o nb e t w e e n5/8r s

4 2

9 9

3 7 6p o l y m o r p h i s ma n d t h e r i s ko fCHDi nH a nC h i n e s e . F e m a l eCHDp a t i e n t sh a v eh i g h e r l e v e l so fT Ga n dT C, ・5

1 0 ・ 第二军医大学学报

2 0

1 4年5月, 第3 5卷andw h e no v e r6 0y e a ro l d , CHDp a t i e n t sh a v ea l o w e rHD Ll e v e l t h a nn o n CHDc o n t r o l s . [ ]coronaryd i s e a s e ;

A T P b i n d i n gc a s s e t t e t r a n s p o r t e r s ;

A B C G 5;

A B C G 8;

p h y t o s t e r o l ;

l i p i d s ;

r s

4 2

9 9

3 7

6 [ A c a dJS e cM i lM e dU n i v ,

2 0

1 4,

3 5 (

5 ) :

5 0

9

5 1

4 ] 冠心病又叫冠状动脉粥样硬化, 是由于粥样斑 块在动脉中沉积使动脉变窄或者堵塞引起的炎症性 疾病.高三酰甘油( T G) 、 高低密度脂蛋白 ( L D L) 、 低高密度脂蛋白( HD L) 等血脂和脂蛋白变化都能增 加冠心病风险 [

1 3] .三磷酸腺苷结合盒 ( AT Pb i n d i n gc a s s e t t e , A B C)转运体家族参与离子、 氨基酸、 磷脂、 胆固醇、 肽类以及底物药物的跨膜转运[

4 ] .其亚 家族中, A B C G 5和ABCG8能抑制肠道膳食中的脂 类吸收, 并促进胆固醇通过胆汁排泄[

4 5] .其作为跨 膜转运蛋白, 参与固醇逆向转运, 在减少肠道吸收和 促进肝脏排泄固醇, 控制血浆固醇水平以及维持机 体固醇平衡中发挥重要作用[

6 ] . 5和 8基因部分位点突变能导致罕 见的 脂质代谢异常的常染色体缺陷隐性遗传疾病― ― ―谷固醇血症, 该病能增加小肠上皮细胞对植 物固醇及其他固醇的吸收能力, 而在胆汁中浓聚[ 7] , 最后导致血浆中植物固醇和胆固醇含量增高, 加速 动脉粥样硬化[ 4, 8] .目前研究较多的5/陋8突变中, 已发现 D

1 9 H 和T400K的突变都能够 增加患谷固醇血症和冠心病的风险[ 5,

9 ] , 而Y54C多态性则与缺血性卒中相关, 其5

4 YY 纯合子可能是 年轻男性缺血性卒中的保护因子, 并能影响血浆植 物固醇和胆固醇水平[

1 0] . 一项大规模的 基因中心分析 发现了一些与冠 心病相关的突变位点, 其中包括位于 5/陋8的r s

4 2

9 9

3 7 6, 该突变在欧洲人群中能增加冠心 病的风险, 但在南亚人群中, 还没发现其与冠心病的 相关性[

1 1 ] . 根据国际人类基因组单体型图计划(TheI n t e r n a t i o n a lH a p M a pP r o j e c t ) 的报道, 该位点在欧洲人群中基因型分布较均衡( T T=4 8. 7%, G T=4 5. 1%, G G=6. 2%) , 而在中国汉族人群中却 比较集中( T T=9 7. 7%,G T=2. 3%,G G=0%) , 存在较大的种族和地区差异性.因此本研究选择该 位点作为研究对象, 探究其在中国人群中是否与冠 心病存在相关性, 并对脂质及脂蛋白水平与冠心病 的关系进行分析.

1 材料和方法 1.

1 一般资料 研究对象共8

1 9例, 分为3组: 冠 心病患者 组290例, 男性210例, 女性80例, 平均(62.

0 7±9.

5 0 ) 岁;

非冠心病对照组1

9 8例, 男性1

0 1 例, 女性9 7例, 平均(

5 8.

6 6±9.

3 1) 岁;

正常健康对 照组3

3 1例, 男性8 6例, 女性2

4 5例, 平均(

6 3.

4 1± 9.

2 1) 岁. 冠心病患者组和非冠心病对照组均为2008年5月到2

0 1 1年1 1月在浙江省宁波市鄞州人 民医院心血管科的住院患者, 其中冠心病患者诊断标 准为经标准冠脉造影[

1 2 ] 结果显示其至少1支主要冠 状动脉≥

5 0 %狭窄[

1 3 ] 或有冠脉旁路移植手术或支架 历史;

非冠心病对照组为有冠心病类似症状来院检查 的患者, 但经标准冠脉造影[

1 2 ] 结果显示其主要冠状动 脉<

5 0 %狭窄, 并没有其他动脉血管疾病.3

3 1例正 常对照者为同期该院健康体检者, 体检结果均没有冠 心病且没有冠心病类似症状, 故不是潜在的风险人 群.所有研究对象均排除肝肾功能不全、 先天性心脏 病、 肿瘤等严重疾病.本研究经宁波市医学伦理委员 会批准, 所有研究对象均签署知情同意书. 1.

2 患者生化指标的测定 T G、总胆固醇( T C) 、 HD L和LDL采用酶终点滴定法检测.载脂蛋白(apo)A、 a p o B 和a p o E 水平采用透射比浊法测定. 而ELISA方法和溴甲酚绿法分别用来测定脂蛋白 L p ( a) 和白蛋白(ALB) 的浓度. 丙氨酸转氨酶(ALT) 、天冬氨酸转氨酶(AST) 、碱性磷酸酶(ALP) 、 γ 谷氨酰转肽酶( G G T) 的测定根据国际临 床化学和实验室医学联盟( I n t e r n a t i o n a lF e d e r a t i o n o f C l i n i c a l C h e m i s t r y a n d L a b o r a t o r y M e d i c i n e , I F C C) 提供的标准测定方法来检测. 1.

3 基因组DNA 提取每例研究对象均采集2m L静脉血, 用3. 2%柠檬酸钠溶液抗凝, 并于4℃ 存放1d , 随后置于―8 0℃保存至提取时解冻.实验 使用厦 门至善生物科技有限公司提供的LabAid820核酸自动提取仪以及全血基因组 D NA 试剂盒, 从5

0 0μ L全血标本中提取基因组 D N A, 严格按说明 书操作.经过 样品裂解、 目 标核 酸与磁珠 特异性结 合、 核酸 磁珠复合物洗涤、 目标核酸洗脱等步骤, 最后 得到 D N A.随后用核酸浓度测定仪( N a n o d r o p1

0 0

0 , W i l m i n g t o n , U S A) 测定 D N A 浓度. 1.

4 基因多态性分析 采用美国 S e q u e n o m 公司 第5期. 胡鸣颖, 等. 中国汉族冠心病人群 5/8基因r s

4 2

9 9

3 7 6多态性及脂质水平分析 ・5

1 1 ・ M a s s AR R AY 时间飞 行质谱技术[

1 4 ] 进行单核苷酸多态性( s i n g l en u c l e o t i d ep o l y m o r p h i s m, S N P) 的基 因分 型. 该实验通过PCR扩增、 虾碱性磷酸酶(shrimpa l k a l i........