PDF《里丝 严银钫 杨学楼》

7 一第8卷 第l期1993年3月 中重病毒学VI ROLOGI CA SI NI CA vo] .

8 N.

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1 9

93 两株蓖麻蚕 核型 多角体 病毒 的 比较研 究 里丝 严银钫 杨学楼 ( 中 国科 学院 武汉 病毒 研究 所, ~

4 3

0 0

7 1 )

1 田泽君(四川 省林 科院 森保 室,成都 ,6

1 0

0 6

6 ) 提要本文描述来源不同的两株蓖麻蚕多角体病毒的形态特征 和理化特性.一株为较长期饲喂马桑 叶昀蓖麻蚕从 自然罹死的幼 虫 和蛹 中分 离的多角体病 毒(简称Ar s c s NP V) ;

另一 株为饲喂蓖麻 叶的蓖麻蚕从幼虫分离的核型多角体病毒(简称Ar NPV) . 两株核型 多角体滴毒的形 态大小略有差异,Ar s c s NP V~ 角体直径大小约0.7--1.9Pm. 最大的可达2.5m;

Ar NP V~ 体大 小约1.2―2.

0 pr o 最大的可 迭2.9Pm. 两株NP V 病毒粒子均为 杆状,Ar s c s NPV病毒粒子大 小平均为310*5 O n t o;

Ar NPV 病毒粒子大 小为

3 5 0*5 O hm. 两株NPV均为多粒包埋 型.两株NP V的多角体蛋白均 为单一组分,Ar s e s NP V多角体蛋白分 子置为27.5kd;

Ar NP V 多角体蛋白分子量为28kd两NP V 的病毒粒子结构多肽均含 有2l 条 多肽 , 其 中各 多肽 分 子量 有所差异.Ar s c s NPV的病毒粒子多肽分子量范围为 l l ― i

3 0 kd ;

Ar NP V病毒粒子多肽 分子量范围为

1 1 ―9

6 k d ,其 中有 l 1种 多肽 分子量彼此相同包括两种主要多肽 (5

4 k d ~

3 3 k d). 用s Ds 一苯酚提取的病毒 接酸 ,经实验证明均为 双链DNA 型使 用几 种内切酶酶解.求得两株NP V 的核酸分子量.Ar s e s NP V 为52.

4 *

1 0'

dl Ar NPV为73.5*i

0 '

d . 关奠词:蓖 麻蚕多角体病毒形志特征病毒粒子蛋白多 肽病毒核酸一-'

―一 蓖麻 蚕是 我国养 蚕业 的~ 个 重要 资源 .在 我国 四川 、湖南 、广 西等 地 因地 制宜, 使 用马桑 叶饲喂 蓖麻 蚕. 由于其 蚕茧质 地优 良J马桑叶 来源 丰富,如今巳成为 山区人 民脱 贫致富的重要付业之一.1989年四川省饲养区发 生大规模流行病,致使养蚕业受 到重大损失经我们分离纯化后研究确认其病原为多角体病毒.为 了研 究从这种饲喂 马桑叶的蓖麻蚕分 离 的多 角体病毒与蓖麻蚕多角体病毒之间的关系,我们对 这两栋NP V进行了形 本 文于

1 9

9 1 年9月17日收 到,1日.2年4月 7日惨 回. 本 课题为 国家自然科 学基盘资 助项 目之 一.奉所 电铙 室协助 拍摄电镜照 片 特此 致谢 . 维普资讯 http://www.cqvip.com 第1瓤罗经等;

两株蓖麻蚕枝型多角体病毒 的比较研究

7 7 态学和理 化特性 的比较 研究 .现将 结果报道 如下 . 材料和方法'

.毒:蓖麻蚕多角体病毒(Ph i l o s s ml a Cy . t b i a r i e l ni D. n . T a n P o ] y b e d r o ~ i

8 Vi r = s 简称Ar NPV )由武汉大学病毒系馈赠. 马桑蚕多角体 病毒~Phi l o s a mi a Cy nt h i a r i c i n i( s u r s u m C o n i a t i a S i n i c a )p o l y h e dr o s i s Vl r u s 简称Ar s c s Np v] 由 四川 省林科院森保室提 饿2.多^体的分一纯化:参照文献l1介绍方 法分离纯化.5.毒粒子的分一纯化:按文献l1方法纯化超离心后获得的病毒粒子, 再经.ph-r08e2B柱层析后获得纯病毒粒子.4.多角体和一 牲子电镶理 寨:职纯多角体和纯病毒粒子经 2*Pr ^负染色后于JEM一100型 C电镜下观察.多角体超薄切片按文献l.1方法.5.多^体蛋白的 分一纯化:纯多角 '

~T'

7 o x

3 2小时后加入碱液4℃

2 0 分钟,t0000r/m离心ls分钟,用0 .

5 r a o l / L P B ― HCl ( p H2 .

0 ) ~ p Hg

7 .

0 . 置冰箱中2小 时,再以3 ∞

0 r / 皿离 心1s分钟,收集多角体蛋白,用0.

0 i mo l / L Na

03 - 0.

0 5 mo l / L Na C1 p H9.

0 解絮~Sepharose6B柱层析.收集蛋白峰 , 将pH调 至6 . 0冰箱静置,收 集多角体蛋 白,解絮后--20 C保 存.B.多^体蛋白和 粒子多眈的SDs―P AGE: 按文献l¨系统垂直板型电泳.分离腔为10卿, 浓缩 胶为4眄. 分子量测定参~Weber~Os b o r al l 方法进行.分子量标准蛋白采 用上 海东风生 化试赉鼍厂生 产 的成 套分子量标 准蛋白. T . 棱lit的提 取:参照李敏棠ll,罗经l】方法进行.采用直接从多角体提取柱睦的方法.8.箍t的二苯腑反应:参 照文献l'

1方法进行.口. 棱t的热 变性羹外嚷啦:取

2 ml核酸 (约含

4 0 , / / g)样品,分成=份 , 一份于100

0 中煮沸lO分钟, 冰 沿骤 冷.另一份作对腰.于uV一300型紫外分光 光度计上测^l I ― Al

1 日值.10.接t的限制性内切 畴畴解分析:参照文献I方法进行.各内切 酶均购自华 羹生 物工程公司.11.攘t的RNa s e 和DNa s e 妊理:参 照文献【'

1方法进行结果一,多角体的形态和大J、在透 视 电镜下 观察 A r s c s NP V多 角体 形态多 呈 三角形 、 四边形 和多边 形, 其大 小约

0 .

7 ―

1 .

9 am最大 的可达

2 .

5 # T M A r NP V 多 角体形态 多为 四 边形和多 边形 ,其大 小约1 .

2 ―

2 .

0 #m,最大 的可 达2 .

9 # m (图1). 在扫 描电镜 下,A r s c s NP V多角体 为不规 则 多面体 ,表面 光滑 .一个 视 野中 有1 /

3 以 上数 目的多角体 表山l 呵许多有规 则 的裂缝 和 凹陷 ,这是病毒 粒子 包埋 点 .由于某种 原 因使病 毒粒子 脱 落丽形 成的 (图2 a).而Ar NP V多 角体 其形态 与Ar s c s NP V相似,但未 观察到病毒粒子包埋 点 (图2 b). 维普资讯 http://www.cqvip.com 审国病毒学A. A ¨ t a N PV

8 20 0* B. Ar N PV

0 g9 0* 图1 .A r 日cNP Y 多 角体 与A T N P V多角 体形态Fi g

1 Po] yhe d r o n e m o r phol osy . f A z ~ e e NPV a 4d A r N PV 第 8卷 A . A r B t

8 N PV B. A r N PV 囤2 . Ar B c 目NPV和ArNP V多 角件扫 描电 镜 现察 F i g .

2 El t e t ~ On s m Ⅱi g m i e = og r ph 0f A ,

3 c s N PV B nd A r PV 以纯 Ar s e s NP V多 角体 悬浮液 (含10个/m)添食蓖 麻蚕 幼 虫相 璎马桑叶 的蓖 麻蚕 幼虫 以及家 蚕幼 虫等 ,7 一lO天后 引起蓖 麻蚕70--8

0 死 亡率 , 用马桑 叶饲 养 的蓖 麻蚕100死亡,不引起家蚕幼虫死亡,对照组无死亡.

二、 病毒粒子形态和大 小Ar s c s NP V病毒粒子呈杆状,两头平截,病毒粒子大小约300―310*5 O h m , 同时可见病毒束,每束中核衣壳数『]1― 4个不等,病毒束【乇约400nm直 径约50―7Onm. Ar ― N P V病毒粒子形态也呈杆状其大小约590―4 O O*4 0―6 O Ⅱ Ⅲ (图5).

三、多角体的超 薄切片观察如图所 示.A r s c s NP V多角体 切片 中可看 到很 多癜 毒束, 每柬 中核 衣数日有 l 一6个.同时也可看到很多空洞,这是病毒粒子包埋点.ArNPV多 角体的超 滓 切片 中也可看到病毒 束,每束中核衣 壳数 目有 l 一9个.在 切片 中未 见有病 毒 包埋点 形成 的 空洞 . 维普资讯 http://www.cqvip.com 筇i批罗经等:两株蓖麻蚕棱型多角体病毒的比较研究

7 9 . . 譬臻囊 冀A r N P V A Ar s c

9 N PV

26 00 0x B. A r H PV

26 0 00X 图4.ArscsNP V 和ArNP V 多体的超 薄切 片观 察Fi g 4. The t hi n s e c t i on oⅡ t he pol yh ed r on s of A r s e s N PV ad Ar N PV

四、 多角体蛋 白和病毒 粒子 的 紫外 吸 收特 性t 提纯的多 角体 蛋白和病 毒粒 子具 有典型 的 紫外 吸 收曲线 ( 图5 ) . 我 们发 现碱 解对 间过 长 的病 毒 粒子 多为核 衣壳,其 紫外吸 收 曲线在 A

2 6 O ― A2

8 O 之 间有 明显 的吸 收蜂 ( 图5 ) . ― ― 病 毒粒 子一一一一多角体 蛋白……一……桉衣壳 一Viri㈣ 一一一一Po1 Y hed p

0 t e i n … 一一Nu~l…pi

9 i d 自波长m) w … e l g t h i Ⅱ Ⅱm 图.5ArgosNp V 病毒粒子 多角体蛋 白、核衣壳的........