PDF《拜尔迪生物》

Beijing BioDee Biotechnology Co.

Ltd. Tel: 010-62960866. Fax: 010-62975155. Website: http://www.biodee.net. Email: [email protected]. 拜尔迪生物 Product Information 活性氧检测试剂盒(DHR 123) ROS Assay Kit (DHR 123) 产品编号 产品名称 规格 DEM100 ROS Assay Kit (DHR 123) 100T 产品简介 活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)包括超氧化物、过氧化氢、羟自由基以及具有高氧化活性的活 性氧代谢产物.活性氧主要由中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞为代表的免疫细胞受到刺激后产生,其它 体细胞在应激条件下线粒体电子传递异常也会产生活性氧.免疫细胞产生的活性氧能够抵御微生物的感染. 在病理条件下,过度产生的活性氧也会导致机体损伤和引发各种疾病. DHR 123(Dihydrorhodamine 123)是活性氧检测的荧光探针,可通过自由扩散进入细胞,并与细胞内 活性氧反应生成能够发射绿色荧光的 R 123(Rhodamine 123)而停留在细胞内,可以用于细胞内活性氧的 检测. 从而用于病理生理研究或药物筛选.本试剂盒利用能够刺激多种免疫细胞产生活性氧的佛波酯 (Phorbol-12-myristate-13-acetate, PMA)为阳性对照. 试剂组成 组份编号 组份名称 规格 数量 DEM100-1 DHR

123 (2 mM)

100 μl/管1DEM100-2 PMA (50 μg/ml)

50 μl/管1说明书 份1需要而未提供的试剂及器材 1. 细胞 2. 细胞培养用 PBS 3. 系列可调节量程移液器及吸头 4. 干净的试管、离心管及

24 孔板 5. 流式细胞仪 储存条件 -20℃储存,保质期

12 个月. 注意事项 1. DHR

123 溶液请尽量避免反复冻融,可以适当分装. 2. 初次使用试剂时,请适当离心后使用. Beijing BioDee Biotechnology Co. Ltd. Tel: 010-62960866. Fax: 010-62975155. Website: http://www.biodee.net. Email: [email protected]. 拜尔迪生物 Product Information 3. 初次测定活性氧,可取小鼠骨髓细胞,1.0*

106 细胞/孔,接种到

24 孔板中,加入终浓度

2 μM 的DHR 123,然后利用终浓度

50 ng/ml PMA 刺激

1 小时,检测活性氧作为阳性对照. 4. 本产品仅限专业人员用于科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品. 5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作. 使用说明 1. 细胞接种及处理:取需要测定的细胞,利用培养基调整到合适浓度后,接种到

24 孔板中. 如果是贴壁细胞,提前一天接种到

24 孔板中,24 小时更换新鲜培养基.然后加入 DHR

123 探针(利用培养基稀释)至终浓度

2 μM,37℃孵育 15min,然后加入活性氧产生刺激剂,37℃ 孵育一定时间.如果是评价药物活性,可以在加入刺激剂前后加入药物共同孵育. 具体检测体系设置如下表所示: 对照组 刺激组 细胞 + + DHR

123 + + 刺激剂 - + 2. 孵育结束后, 收集细胞, 4℃,300g 离心

5 分钟, 弃上清;

然后加入

1 ml 细胞培养用 PBS, 再次 4℃,300g 离心

5 分钟;

0.5 ml PBS 重悬细胞,进行流式细胞测定(FITC 通道) . 数据处理 利用 FlowJo 软件处理流式细胞检测源数据,对各组样品细胞荧光分布作图或统计各组样品细胞平均 荧光强度.如下图所示: 图1:DHR

123 检测中性粒细胞产生的活性氧.取Balb/c 小鼠骨髓细胞,接种到

24 孔板中,加入 DHR

123 探针后,加入 PMA 刺激

1 小时,然后收集细胞进行流式测定,分析中性粒细胞活性氧的产生.* P