PDF《产品说明书》

1 /

4 US EVERBRIGHT? INC.

技术支持: 0512-88965152 www.useverbright.com 产品说明书Super GelRed? 核酸凝胶染料 10,000* 产品货号:S2001 ( in water ) S2002 ( in DMSO ) 产品规格:0.5 mL 储存条件:避光,室温保存 产品介绍 Super GelRed ? 是一种高灵敏、无毒超安全和超稳定的 荧光核酸凝胶染色试剂(在工作浓度中) .它可替代溴化乙 锭(EtBr,EB) ,具有远高于 EB 的灵敏度,同时不需要脱 色.由于 Super GelRed ? 和EB 有相同的光谱特性,因此用 它替代 EB 时不需要更换成像系统. 使用方法 1.胶染法(用法同 EB) (1)制胶时加入 Super GelRed ? 核酸染料 (例如:每50 mL 琼脂糖溶液中加入

5 μL Super GelRed ? 10,000* 储液,以此比例类推) . (2)按照常规方法进行电泳. 注意事项: 此方法染色染料用量相对较少,500 μL 染料大约可以 做100 块50 mL 的胶. 由于 Super GelRed ? 具有良好的热稳定性, 可以在热的 琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却.摇晃,振 荡或者翻转以保证染料充分混匀.也可以选择将 Super GelRed ? 储液加到含有琼脂糖粉末的电泳缓冲液中,然后用 微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶.Super GelRed ? 兼容所有常用的电泳缓冲溶液. 2.泡染法 (1)按照常规方法进行电泳. (2)用H2O 将Super GelRed ? 10,000* 储液稀释约 3,300 倍到 0.1 M NaCl 中,制成 3* 染色液. (例如将

15 μL Super GelRed ? 10,000* 储液,

5 mL

1 M NaCl加到45 mL H2O 中) . (3)将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中, 缓慢加入足量的 3* 染色液浸没凝胶, 室温振荡染色

30 min 左右, 即可获得理想的效果. 最佳染色时间根据凝胶厚度以 及琼脂糖浓度不同而略有不同.对于含 3.5~10%丙烯酰胺 的凝胶,染色时间通常介于

30 min 到1h,并随丙烯酰胺含 量增加而延长. 强烈推荐: 为了缩短泡染时间, 染色液可以预先加热至 70℃ 左右,然后放入凝胶,孵育 10min 即可获得理想的效果.具 体步骤见下页使用说明. 注意事项: 用泡染法染色时,染料用量较多,单次使用的染色液 可重复使用

3 次左右.3*Super GelRed ? 染色液可以大量制 备,在室温下避光保存直至用完. 注:1. 如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用泡 染法染色以确认问题是否与染料有关. 2. 如果染色后问题依旧存在, 则说明问题与染料无关, 请尝试:降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、延长凝胶时间 以保证边缘清晰、改进上样技巧或选择泡染法染色. Super GelRed ? EB 图一. Super GelRed ? 、EB 胶染法电泳效果对比 (1% Agar 凝胶在 1*TBE 缓冲液中电泳,1kb DNA ladder 上样量分别为: 200ng, 100ng, 50ng, 25ng, 使用 302nm 激发的紫外凝胶成像仪拍照. )

2 /

4 US EVERBRIGHT? INC. 技术支持: 0512-88965152 www.useverbright.com Super GelRed? 使用说明

一、实验目的 核酸的琼脂糖凝胶电泳实验, 对核酸 (DNA 或RNA) 进行分离、鉴定和纯化等分析.

二、主要试剂 1. 琼脂糖(如US Everbright A2015) 2. 1* TBE 电泳缓冲液 3. 0.1 M 的NaCl 水溶液 4. DNA Marker: 如US Everbright 1kb DNA ladder (DL2031) 5. 10000*Super GelRed ? in water/DMSO(S2001/2002)

三、实验方案 1. 根椐制胶量及凝胶浓度,准确称量琼脂糖粉(如1%的凝 胶,即1g琼脂糖加入

100 mL 1*TBE) . 2. 加入一定量的 1*TBE 电泳缓冲液 (总液体量不宜超过锥 形瓶的 50%容量) 注:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须一致. 3. 锥形瓶在微波炉中加热,溶化琼脂糖.此操作重复 2-3 次,直至琼脂糖完全溶化,形成均

一、透明溶液. 4.根据实验需要,采用胶染法或者泡染法,两种方法选择一 种即可: 1) 胶染法(用法同 EB) :琼脂糖溶液加入 10000* Super GelRed ? 核酸染料.每50 mL 胶中加入

5 μL Super GelRed ? 核酸染料,并充分混匀,将凝胶溶液倒入制胶模中,然后在 适当位置处插上梳子, 在室温下使胶凝固 (大约

30 min~1 h) . (由于 Super GelRed ? 具有出色的热稳定性,可将试剂直接 加入高温的凝胶溶液中,无需等待凝胶溶液冷却后再加入. 也可采用将 Super GelRed ? 试剂预先与含有琼脂糖粉末的 TBE 溶液混合,加热制成) . 2) 泡染法:直接将不含有 Super GelRed ? 染料的琼脂糖溶 液倒入制胶模中,然后在适当位置处插上梳子, 在室温下使 胶凝固(大约

30 min~1 h) . 5. 将做好的凝胶放置于电泳槽中,上样. 6. 电泳: 在1*TBE 的电泳缓冲液中, 100-120 V 电泳 45-90 min(电泳时间视具体情况而定) . 7. 1) 胶染法: 直接图像采集, 通过标准的透视器 (302 nm) 观察染色凝胶,拍照、保存. 2) 泡染法:用0.1 M 的NaCl 水溶液按照 3300s1 的比 例稀释 Super GelRed ? 浓缩液, 混匀, 制成 3*Super GelRed ? 染色溶液, 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中, 放入凝胶, 缓慢加入足量的 3* 染色溶液浸没凝胶, 室温轻轻振荡染色

30 min 左右,具体染色时间因凝胶浓度和厚度而定. 强烈推荐:为了缩短泡染时间,染色液可以预先加热,然后 放入凝胶, 温育 10min 即可获得理想的效果. 加热方式可采 用水浴法或微波加热法,具体步骤如下: a. 水浴加热法: 将配制的 3*Super GelRed ? 染色液放入 70~75℃的水浴锅中预热,然后将电泳凝胶小心放入 上述预热的染色液中, 在水浴锅中水浴加热 5~10min 左右(泡染期间可以间隔轻摇几次,加速染料与核酸 的结合). b. 微波加热法:将电泳结束后的凝胶放入配制的 3* Super GelRed ? 染色液中,放入微波炉中加热,先加 热约 30s,取出泡染装置,摇床孵育 30s-1min,待染 液温度下降后, 再微波加热 10~15s, 然后摇床孵育, 重复上述步骤 4-5 次 (注意微波加热时间不可过长, 防止琼脂糖凝胶溶化). 8. 图像采集: 通过标准的透视器 (302 nm) 观察染色凝胶, 拍照、保存. (染色溶液可重复使用 2-3 次.如果不是立即 再用的话,建议将用过的染色溶液

4 度保存. )

四、注意事项: 1. 鉴于 Super GelRed ? 的高灵敏性,建议减少 DNA 的上样 量,推荐已知浓度样品的上样量为 50-200 ng/泳道(8 泳道 的小胶孔) , 对于未知浓度的样品, 尝试 1/3 或1/5 的常用上 样量.根据胶孔大小适当增加或降低上样量. 2. 使用胶染法时,经检测 Super GelRed ? 跟市面上的一些

3 /

4 US EVERBRIGHT? INC. 技术支持: 0512-88965152 www.useverbright.com DNA Ladder 存在不匹配的现象, 如Takara、 天根的 marker, 条带分离效果不佳, 因此我们推荐使用的 marker 品牌有 US Everbright、Promega、Vazyme. 3. 推荐用 1* TBE 缓冲液代替 TAE, 因为含硼酸盐的试剂导 电性更好. 电泳时电压不宜过高, 一般 TBE 不要超过 120V, TAE 不要超过

100 V. 4. 染料无需低温冷藏,请于室温下储存,以避免沉淀,若 发现沉淀,请将染料加热至 45-50℃,2 min,振荡溶解,不 影响使用效果. 推荐:聚丙烯酰胺凝胶核酸电泳推荐使用我司 S2005 Super Page GelRed ? 染料,效果更佳. 常见问题 问题 建议 胶染法中 DNA 条带弥散,拖尾 1.将DNA 上样量减少至三分之一或五分之一.Super GelRed ? 比EB 更加 灵敏, 条带的弥散或拖尾可能是超载造成的. 这是 DNA ladder 的常见现象, 推荐使用我司提供的与 Super GelRed ? 匹配性较好的 DNA ladder. 2.用泡染法(后染)代替胶染法(前染) . 3.使用低浓度的琼脂糖凝胶检测大片段 DNA. 4.更换电泳缓冲液,TBE 缓冲液比 TAE 缓冲液的效果好. 5.loading buffer 含有 SDS 可能会引起条带的弥散和拖尾,如果发生这种情 况,建议使用泡染法. 胶染法中 DNA 迁移率的差异 由于 Super GelRed ? 的分子量较大,导致其不能进入细胞,保证了染料的 安全性. 但是, 大分子量导致 DNA 的迁移速率可能会受到染料与 DNA 比 率的影响. 1. 将DNA 上样量减少至三分之一或五分之一. 2. 使用泡染法,避免染料在电泳过程中对迁移造成干扰. 荧光较弱,一段时间后染料性能 降低,或使用后染法染色不均匀 染料可能在溶液中已沉淀. 1. 加热 Super GelRed ? 至45-50℃,2min,涡旋溶解. 2. 染料在室温下储存,避免沉淀. 常见问答 回答 Super GelRed ? 是否可用于单链 DNA 或RNA 染色? Super GelRed ? 可以用来染色单链 DNA 和RNA,但是它对双链 DNA 的灵 敏度是单链 DNA 或RNA 的五倍. Super GelRed ? 与哪些 loading buffer 兼容? 我们通常使用含有 15% glycerol, 7.5% Ficoll 400, 0.05% Bromophenol Blue, and 0.1% Patent Blue VF 的6* loading buffer.在内部测试中,包含 0.1% Orange G 的6X loading buffer 在Super GelRed ? 的前染和后染中都有良好 的效果,loading buffer 中的 SDS 可能会造成 Super GelRed ? 的前染中条带 的弥散和拖尾.如果出现这种情况,我们建议使用后染法.

4 /

4 US EVERBRIGHT? INC. 技术支持: 0512-88965152 www.useverbright.com Super GelRed ? 预制凝胶跑完电泳 后是否可以重复使用? Super GelRed ? 预制凝胶可重复使用 2-3 次,但我们不建议客户重复使用, 因为这会降低后续电泳的信号强度. Super GelRed ? 该如何处理掉? Super GelRed ? 已被相关部门批准可直接倒进下水道. 但是, 由于法规不同, 请联系您当地的安全监管部门, 获取相关条例. Super GelRed ? 还可以吸附 到活性炭上做为化学废物处理. Super GelRed ? 检测下限是什么? 一些用户反馈能够检测 0.1 ng 的DNA 条带.但是,检测的极限还与仪器 的灵敏度和曝光设置有关. Super GelRed ? 的结合机制是什 么? Super GelRed ? 通过静电吸引的方式与 DNA 结合. Super GelRed ? 是否需要避光? Super GelRed ? 是稳定的染料. 你可以在室内光线下使用染料, 但是我们建 议染料保存时注意避光. 10000* Super GelRed ? in DMSO or water 之间是否有区别? 水溶解的产品相对于用 DMSO 溶解的产品,是一个全新的改良.由于 DMSO 会被皮肤吸收,我们建议染料溶于水,以避免 DMSO 的危害.鉴 于有些用户不希望改变实验方案,我们将继续提供储存在 DMSO 中的染 料. 相关产品 货号 产品名称 S2003-0.5mL Super GelGreen ? 10,000*in water S2004-0.5mL Super GelGreen ? , 10,000*in DMSO S2005-0.5mL Super Page GelRed ? , 10,000*in water S2006-0.5mL, 2.5mL 6*Super GelRed ? Prestain Loading Buffer S2025-2.5mL, 10mL Super GelRed ? Prestain Loading Buffer Plus E2039-50T, 100T EB 去毒剂 A2015-100g 琼脂糖 DL2029-0.5mL 100bp DNA Ladder DL2030-0.5mL DL2000 DNA Ladder DL2036-0.5mL 5000bp DNA Ladder DL2031-0.5mL 1kb DNA Ladder DL2037-0.5mL 1.5kb DNA Ladder S2007-1mL Super EvaGreen ? , 20*in water S2008-1mL, 5mL Fast Super EvaGreen ? qPCR Master Mix S2014-1mL, 5mL 2*SYBR Green qPCR Master Mix ........