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JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit ――细胞凋亡检测试剂盒 产品货号 包装规格 A048

100 次 储存条件:2~6℃,避光保存.

激发/发射波长:JC-1: 514/529 and

590 nm 产品说明书 GeneCopoeia, Inc. 广州易锦生物技术有限公司 广州高新技术产业开发区广州科学城 掬泉路

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2015 GeneCopoeia, Inc. JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit 使用说明书

2 JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit 产品货号: A048 试剂盒组份: 组份 试剂名称 包装 浓度 储存条件 组份 A JC-1 5*100 ?l 100* -20 ℃,避光. 组份 B CCCP

120 ?l

25 mM in DMSO -20 ℃,避光. 注:按照推荐的储存条件保存有效期为

1 年. 产品介绍 线粒体膜电位Δψm 是一个体现细胞健康水平的线粒体功能性参数.线粒体膜电 位在细胞凋亡发生时,会受到干扰破坏.这种膜电位变化可以通过荧光探针 5,5'

,6,6'

-四氯-1,1'

,3,3'

-四乙基苯酸盐-咪唑羰基花青素(JC-1) 来检测.在健康细 胞中,线粒体膜电位水平高,JC-1 进入细胞后容易在线粒体中富集成为多聚体, 呈现红色荧光.而在凋亡或疾病细胞中,线粒体膜电位下降,JC-1 以单体形式 出现,发出绿色荧光.利用 JC-1 探针荧光信号的变化来检测凋亡细胞中线粒体 膜电位的变化是快速简单有效的检测方法,可以用于流式结果分析,荧光显微镜 观察和

96 孔荧光酶标板读数. 该检测方法操作简单方便,只需加 JC-1 探针到细胞培养液中,孵育

15 分钟,即 可进行荧光显微镜观察或流式细胞仪分析. 实验步骤 流式细胞仪分析 1.1 收集细胞,用0.5 ml 预热的 PBS 重悬细胞,并调节细胞密度约为 1*106 细胞/ml. 1.2 按照实验设计对细胞进行诱导.并设定一组未诱导的细胞作为阴性对照组. 在阳性对照组中,加入

1 ?l

25 mM CCCP(组份 B) ,37℃孵育

10 分钟. 1.3 离心收集细胞,弃上清,用0.5 ml 预热的 PBS 重悬细胞. 1.4 往每 0.5 ml 细胞悬液中加入 5?l JC-1 探针(组份 A) ,并在 37℃,5% CO2 条件下孵育 15~30 分钟. 1.5 离心收集细胞,弃上清,用0.5 ml 预热的 PBS 重悬细胞.重复洗涤一次. 1.6 用流式细胞仪分析,选用

488 nm 激光光源,滤光片选用 FITC 和罗丹明. JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit 使用说明书

3 荧光显微镜分析 悬浮细胞 2.1 收集细胞,用0.5 ml 预热的 PBS 重悬细胞,并调节细胞密度约为 1*106 细胞/ml. 2.2 按照实验设计对细胞进行诱导.并设定一组未诱导的细胞作为阴性对照组. 在阳性对照组中,加入

1 ?l

25 mM CCCP(组份 B) ,37℃孵育

10 分钟. 2.3 离心收集细胞,弃上清,用0.5 ml 预热的 PBS 重悬细胞. 2.4 往每 0.5 ml 细胞悬液中加入 5?l JC-1 探针(组份 A) ,并在 37℃,5% CO2 条件下孵育 15~30 分钟. 2.5 离心收集细胞,弃上清,用0.5 ml 预热的 PBS 重悬细胞.重复洗涤一次. 2.6 滴一滴细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞.用长波段滤光片在荧光 显微镜同时观察绿色和红色荧光信号. 贴壁细胞 3.1 直接用盖玻片来培养细胞. 3.2 按照实验设计对细胞进行诱导.并设定一组未诱导的细胞作为阴性对照组. 在阳性对照组中,加入

1 ?l

25 mM CCCP(组份 B) ,37℃孵育

10 分钟. 3.3 用PBS 洗涤细胞两次. 3.4 准备 1* JC-1 工作液.使用预热的 PBS 按照 1:100 比例稀释 100* JC-1 溶液(组份 A) .每个细胞样本中加入 0.5 ml 1* JC-1 工作液,37℃,5% CO2 条件下孵育 15~30 分钟. 3.5 用PBS 洗涤细胞两次. 3.6 将盖玻片倒置于载玻片上,用长波段滤光片在荧光显微镜同时观察绿色和红 色荧光信号. 荧光酶标仪分析 悬浮细胞 4.1 收集细胞,用0.5 ml 预热的 PBS 重悬细胞,并调节细胞密度约为 1*106 细胞/ml. 4.2 按照实验设计对细胞进行诱导.并设定一组未诱导的细胞作为阴性对照组. 在阳性对照组中,加入

1 ?l

25 mM CCCP(组份 B) ,37℃孵育

10 分钟. 4.3 离心收集细胞,弃上清,用0.5 ml 预热的 PBS 重悬细胞. 4.4 往每 0.5 ml 细胞悬液中加入 5?l JC-1 探针(组份 A) ,并在 37℃,5% CO2 条件下孵育 15~30 分钟. JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit 使用说明书

4 4.5 离心收集细胞,弃上清,用0.6 ml 预热的 PBS 重悬细胞.重复洗涤一次. 4.6 往黑色的

96 孔板中每孔加入

200 ?l 细胞悬液. 4.7 用荧光酶标仪分别检测绿色和红色荧光信号.绿色荧光信号采用激发/发射 波长为 485/535 nm;

红色荧光信号采用激发/发射波长为 550/600 nm. 4.8 计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值. 贴壁细胞 5.1 接种到黑色的

96 孔板,并培养至正常生长状态. 5.2 按照实验设计对细胞进行诱导.并设定一组未诱导的细胞作为阴性对照组. 在阳性对照组中,加入

1 ?l

25 mM CCCP(组份 B) ,37℃孵育

10 分钟. 5.3 用PBS 洗涤细胞一次. 5.4 准备 1* JC-1 工作液.使用预热的 PBS 按照 1:100 比例稀释 100* JC-1 溶液(组份 A) .每孔加入

200 ?l 1* JC-1 工作液,37℃,5% CO2 条件下孵育 15~30 分钟. 5.5 用PBS 洗涤细胞两次.每孔加入

200 ?l PBS. 5.6 用荧光酶标仪分别检测绿色和红色荧光信号. 绿色荧光信号采用激发/发射波 长为 485/535 nm;

红色荧光信号采用激发/发射波长为 550/600 nm. 5.7 计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值. 实验案例 使用

10 μM 喜树碱处理 Jurkat 细胞

4 小时作为阳性实验组,同时设置未处理组 做阴性对照.使用 JC-1 探针对以上两组细胞按实验操作说明进行处理,流式细 胞仪进行分析.结果显示,阳性实验组(右图)相比对照组(左图) ,获得更高 的凋亡细胞数量. ........