PDF《0卅 一扭f》

0卅 一扭f 第14卷第

4 期1999年

1 2月中国病毒学Vl R0L0Gl CA S I N I CA W

1 4 No.

4 1

3 e c.

19 99 汉坦 病毒核 壳蛋白重 组抗 原的制 备和基 因分型 的研 究,,

廑盏 握筮_-Z长军 雷万里 魏春宝 叶春燕 R

3 7

2 . {

2 , ( 南京军 区军事 医学 研究所 , 南京210002)摘要根据 HF R S V汉 滩型 ( HT N) 代表 株76.118和汉 城型 ( s r v

3 ) 代表 株R2 2基 因资 料.设计了 两组 引物 . 用 电脑 软件 分析证 明 设计 符 合引物 标准 .以一 组引 物克 隆垒 长 s基 因片 段和 N端 的部 分s基因片 段.井使它 们在 T 7系统 进行 融合 表达 和非融合 表达.非融 合表 达产量虽不及融 合表达高 , 但 生物活性 好.以非融 合表达 的两 个 s基 因片段 产 物作 闻接 E L I S A的包被抗 原.其工作 浓 度均达

1 :

1 0

0 0

0 .用 另一组 引物 建立 了逆转 录. 聚合 酶链 式反 应(RT- P CR ) . 检测我国不 同地区由8种主要宿 主分离的37个 H F R S V 毒株, 2个阳性标准对照毒辣和 5个阴性对照标本. 井与eEL I S A法 比较 , 二者 阳性 检 出率分 别为100%和

8 4.

6 %. 符合 率为

8 4 . 6%. 但前 者 比后者 敏 感性 高15.4%.对其 中2O个毒 株的 P C R扩 增产 物先后 用RsaI和HindⅢ作 二级 酶切 , 建立 了逆 转录一 聚 合酶链 式反 应一 眼 制性 片段 长度多态性 分析 ( R T - P C R― R F L p ) 分型法.被 定为HT N 型的9株 . S E O型的 8辣. 余 3株未能 定型.此

2 O个毒株曾 用血清学方法分 型.仅l1株 分 型成 功.与RT-PCR-RFLP法 结果 符合 .分 型成 功率 R T - P C R ― R F L P法 比血清法 高30%. 关 键调 肾 综合 征出 血 热病 毒, 董固 盆型一 里望苎里一 逆转录 一聚合酶 链 式反 应・ 限制 性片 段长厦 多态性分析(RT―PCR.RVLP)H F y 、R T - P 跌. t T ― P e R ― N : 上P肾综合征出血热病 毒( HF R s v) 是布 尼亚病毒 科汉坦病毒属 成员. 目前 已知该 属 至步 可分为8个血清型 . 且其各 型问均 有交叉反 应.其 中的汉滩 型( HTNv) 与汉 城型 ( s E0 l v) 在我国野生 动物 中广泛分 布和传播 . 并 引起 病死率 较高 的 肾综 合 征出血 热(HF I ) . 因此 倍受重视….HF RS V抗原检 测、分型和流行病 学 目前还存在许 多亟待解决 的问题 : 现行的抗原检 测法敏感性 、 简便性 、 特 异性 尚不理想, 且无安全性好的优 质抗原 : 分型方法 不仅操作 繁琐 、 费时 . 且对不少毒株不能准 确分型 ;

流行病 学上对各型别的地 理分 布还 不很清楚 .有鉴于此 . 本研 究 研制了 HF RS V的核壳工 作抗原 . 建立 了RT- P C R检测方法和 R T- P C R. R F L P分型方法 .

1 材 料与 方法1.1质粒 与菌种 古HF RS V

7 6 .

1 1 8株 S基 因片段 e DNA的 质粒 由 中国预防 医学 科学 院病 毒所 杭 长寿 研究员惠赠 ;

表达 质粒 p T S A P At 由 美国 C a n t o r 教授 惠赠 ;

质粒 p E t -

2 8 a [ . 菌株 E. c o / i B L -

2 1 (

1 3m ) 系本 室保 存.12引物 的设 计与台 成根据报 道的 t - I FR S V

7 6 .

1 1 8株 S片段 e D NA序列 . 设 计第 一组 引物 { 引物

1 5 '

- A TG C A T G C G G C CG C T A C C A T G G C A A C T A T G GA GG-

3 . 与 s片段 e D NA

3 4 .

5 2序 列相 同,古Nc oI位点;

引物25'

-GA T C GT C GA c TT A GA Tc T A GA GT T TC A A AG GC T C -

3 .与 S片段 e DNA

1 3

2 4 .

1 3

0 8序列 互收稿日期 :