PDF《产方法》

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44 中国实验动物学会团体标准T/CALAS x―201x 实验动物 小鼠生物净化―胚胎移植和剖腹 产方法 Laboratory animal -- Method of Embryo transfer and cesarean section for Biological purification of mice (征求意见稿) XXXX - XX - 发布 - XX - XX 实施 中国实验动物学会 发布T/CALAS XXXXX―XXXX

1 前??言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则编写. 本标准附录 A 为规范性附录,附录 B 为资料性附录. 本标准由中国实验动物学会归口. 本标准由全国实验动物标准化技术委员会(SAC/TC281)技术审查. 本标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草. 本标准主要起草单位:广东省实验动物监测所. 本标准主要起草人:李舸,张钰,刘书华,李韵峰,黄韧,关雅伦. T/CALAS XXXXX―XXXX

2 实验动物 小鼠生物净化―胚胎移植和剖腹产方法

1 范围 本标准规定了小鼠生物净化胚胎移植和剖腹产的方法. 本标准适用于小鼠的生物净化.

2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的. 凡是注日期的引用文件, 仅所注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.

3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准. 3.1 超数排卵 superovulation 给供卵雌性注射促性腺激素, 使其排出比自然情况下多几倍到十几倍的卵子, 用于配种或者人工授 精需要. 3.2 体外受精 in vitro fertilization 将卵子与精子取出,在人为操作下进行体外受精,并培养成胚胎. 3.3 胚胎移植 指将雌性动物的早期胚胎,或者通过体外受精及及其他方式得到的胚胎,移植到同种的、生理状态 相同的其他雌性动物体内,使之继续发育为新个体的技术. 3.4 剖腹产 利用胎盘具有屏障的作用,采取无菌剖腹手术取出胎儿,切断母仔纵向转播疾病的途径.

4 生物净化方法原理 生物净化方法目前比较可行的包括胚胎移植和剖宫取胎(剖腹产).胚胎移植又称受精卵移植,俗 称人工授胎或借腹怀胎,是指将雌性动物的早期胚胎,或者通过体外受精及及其他方式得到的胚胎,移 植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内,使之继续发育为新个体的技术.它的本质是生产胚胎 的供体和孕育胚胎的受体共同繁殖后代的过程. 它的意义是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖能力. 剖 宫取胎(剖腹产)是利用胎盘具有屏障的作用,可阻止病原微生物浸入这一作用,采取无菌剖腹手术取 出胎儿,切断母仔纵向转播疾病的途径,从而达到生物净化的作用. T/CALAS XXXXX―XXXX

3 5 主要设备和材料 5.1 体式显微镜. 5.2 电子天平. 5.3 生物安全柜. 5.4 培养平皿(35mm). 5.5 微量移液器(0.1~2μL,1~10μL,10~100μL,100~1000μL). 5.6 注射器(1ml). 5.7 口吸管. 5.8 采样工具:剪刀、精细镊子和缝合钉等. 5.9 CO2 培养箱 5.10 冰箱(-20℃).

6 试剂 除特别说明外,所有实验用试剂均为分析纯;

实验用水为去离子水. 6.1 PMSG:用生理盐水配制成 5IU/0.1ml 方便小鼠腹腔注射用. 6.2 HCG: 用生理盐水配制成 5IU/0.1ml 方便小鼠腹腔注射用. 6.3 HTF 试剂:配制方法见附录 B. 6.4 GSH:谷胱甘肽. 6.5 石蜡油.

7 净化方法 7.1 胚胎移植 实验操作及处理按照安全实验操作规范的规定,由具备相关资质的工作人员进行相应操作. 7.1.1 结扎雄鼠的准备 选择5~7周龄的SPF级健康雄鼠,利用切断雄鼠输精管的方法(见附录A) ,依据动物福利相关内容 对其进行术后护理.一般小鼠手术后两周即完全康复,在使用该雄鼠前,用同样干净的健康雌鼠和结扎 雄鼠合笼,有阴道栓的雌鼠单笼饲养2~3周,如确定没有怀孕表明雄鼠结扎成功. 7.1.2 代孕雌鼠的准备 选择 8~10 周龄的 SPF 级健康雌鼠,本实验室一般选择 ICR 小鼠,代孕雌鼠用于输卵管移植小鼠前 一天下午