PDF《基于 BODIPY 荧光染料的 pH 荧光探针》

1 所示)? 在对生物样品的耐碱能力进行研究的过程中?碱性 pH 荧光探针将在微观极端 pH 值检 测方面发挥重要作用.

1 实验部分 1.

1 实验原料与仪器 1?2~二氯乙烷:AR?阿拉丁试剂?三氯氧磷:AR?西亚试剂?三溴化硼:AR?阿拉 丁试剂?三氟化硼乙醚溶液:46. 5% ?阿拉丁试剂?吗啡啉:AR?99% ?阿拉丁试剂?氯化钠、硫酸钠:天津 博迪化工股份有限公司?三乙胺、乙腈:国药集团化学试剂有限公司?乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚(60

90 ℃):AR?天津富宇精细化工有限公司.

400 MHz 核磁共振(1 H NMR): Inova (400)?美国 Varian 公司?液质联用仪(LC~MS):1260~6224~LC~ MS TOF?美国 Agilent 公司?紫外~可见分光光度计( UV~vis):SHIMADZU UV~1800?荧光分光光度计: Agilent Cary Eclipse Fluorescence spectrophotometer. 1.

2 试剂配制 K2 HPO4 ~NaOH 缓冲溶液的配制:称取 22.

80 g 的K2 HPO4 ?3H2 O 溶解于烧杯中?小心 转移至

1 L 的容量瓶中并定容?制得浓度为 0.

10 mol/ L 的K2 HPO4 溶液?然后取

10 份上述 K2 HPO4 溶液? 用1.

00 mol/ L 的NaOH 溶液调节 pH 至9. 06?9. 39?9. 71?9. 96?10. 28?10. 56?10. 88?11. 15?11. 47? 11. 76?制备不同 pH 的缓冲溶液. HO~BODIPY~N 浓溶液的配制:称取 2.

00 mg 的HO~BODIPY~N 溶于 4.

62 mL 乙腈溶液中?制备探 针浓溶液?[HO~BODIPY~N] =

1 * 10~3 mol/ L?测试时?准确量取适量探针浓溶液?将其稀释至所需浓 度. 1.

3 合成路线 HO~BODIPY~Cl 的合成:准确称取 200.

00 mg (0.

97 mmol)化合物

2 于150 mL 圆底烧 第6期袁少华?等:基于 BODIPY 荧光染料的 pH 荧光探针

553 瓶中?加入适量 1?2~二氯乙烷?充入氮气进行保护?搅拌至完全溶解?至黄色透明状?然后向其中加入 0.

50 mL (5.

48 mmol)三氯氧磷?搅拌

2 h 左右后?再称取 200.

00 mg (1.

24 mmol)化合物

1 溶于少量的 1?2~二氯乙烷溶液?并滴加入上述体系中?升温至

88 ℃ 回流 2.

5 h?TLC(薄层色谱法)实时监测反应进 程?待反应充分后?冷却至室温?加入饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应体系中剩余的三氯氧磷?至无气泡产 生?用二氯甲烷进行萃取?饱和食盐水洗涤三次?合并有机相?无水硫酸钠干燥?滤液除去溶剂后?进一步 溶于适量干燥的二氯甲烷中?搅拌降温至 -

20 ℃ 再加入 0.

50 mL (5.

28 mmol) 的三溴化硼?低温反应

4 h?TLC 实时监测?待反应完全后?加入无水甲醇猝灭反应体系中剩余的三溴化硼?室温继续搅拌

20 min 后?用二氯甲烷进行萃取?饱和食盐水洗涤三次?收取有机层?合并有机相?无水硫酸钠干燥?滤液除 去溶剂并用真空泵彻底抽干. 将所得固体再次溶于适量干燥的二氯甲烷中?搅拌至溶解完全后?加入 2.

80 mL (20.

15 mmol)的三 乙胺?室温搅拌

5 min 后降温至

0 ℃?再加入

3 mL 的三氟化硼乙醚溶液?继续搅拌并恢复至室温?搅拌 0.

5 h?TLC 实时监测?待反应完全后?加水猝灭反应?用二氯甲烷进行萃取?水洗涤

3 次?饱和食盐水洗 涤两次?收取有机层?合并有机相?无水硫酸钠干燥?用砂芯漏斗过滤?取滤液并除去溶剂?柱层析(石油 醚:乙酸乙酯 = 15∶

1 逐渐变为 4∶ 1)得到深紫色带有金属光泽的固体 85.

30 mg? 产率 22. 8% ?1 H NMR (400 MHz? d~DMSO):δ = 11.

07 (s? H)? 7.

65 7.

48 ( m? 6H)? 6.

83 ( s? 1H)? 6.

66 6. 63( dd? 2H)? 6.

57 (d? 1H)? 1.

75 (s? 3H) ?

13 C NMR (100 MHz? d~DMSO): δ = 164. 7? 152. 1? 143. 6? 142. 2? 139. 9? 136. 2? 134. 8? 133. 2? 130. 4? 129. 5? 129. 2? 127. 8? 125. 9? 118. 5? 117. 0? 97. 8? 12. 8? HRMS (ESI) calcd for C20 H13 N2 BClF2 O~ [M~H]~ : 381.