PDF《0卷第4期》

厂1第10卷第4期

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9 5年l2月 中国病毒学vI R 0L0 G I C A s I N I C A

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0 N O.4 De c ,

1 995 戊肝病毒活性肽 的选择 、 合成与应用 c 瓣2 匣004冉33)/・2/(第二军医大学莆牛物学教研室,上海弓・l崔大敷、/俞超崔恒冉f/提要对戊 型肝炎病 毒(HE V) 编码 蛋 白序 列 进行 r亲水性 分析及= 级结 构预测,选择襄水 性强、具有 转角与 B _ 折叠的区段 , 采用多酞固相合成法合成了 H E V基因组

3 个开读框架( O R F , O R F z 和OR F ) 巾可能 的抗 原表 位,以免疫 学方 法进 行 鉴定 并选 出 r分别 来自HE V3个OR F 的、 具有重饕生 物 活性 与应 用前 景的3段肚 ( E H- E H挪EH)在此基 础上 , 避行了抗 HE V E L I S A 新 型检 测试剂盘的实验室研究脚 临 床试用.结果表明, 所研究的戊肝抗体检测试剂盒特异性高 临床符合 性好、具有 可重 复性 , 在戊肝 辅助 诊断 及流 行病学 调查 中具有 重要 意义..关键迥些 里壅塞蓦,基因序列・合成肽,酶联免疫吸附试验参l l 当f/.1989年 , Re y e s 等成功地获得了戊 型肝炎病 毒(HE V) 的基 因克 隆E , 并证 实是 鲣肠道传播的非甲非 乙 型肝 炎(现称戊型肝炎)的病 原体 E .现 已证 明E , HE V 呈球形,直径27~34nm, 基 因组 是单股正链RNA, 长约

7 .

6 k b , 由5.非编码区、 非结构区、结构和3一非编码 区组 成,包括三 开读框 架(ORF ) .O RF 位于基因组的

5 端,长5079bp(第28~5 l

0 7位) , 编码病 毒复制所 需要 的RNA 复制酶 、 蛋 白酶和解螺旋酶 等,为非结构 区基因 ;

O RF 及ORF. 位于基 因组 的3端,ORF

3 长369bp(第5103~5

4 7 2位),OR F

2 长I980bp(5l47~7

1 2 8位) , 它们都 编码病毒的结 构蛋白l986~】988年 , 在我 国新 疆发生了戊肝 爆发流行,病人数 超过I2打 北京、吉林 、 辽宁、 内蒙 、 河北、 湖北 、 山东和 上海 等许 多省市也报道有戊肝 散在发生或流行 .目前 还 缺乏特异 、 肓效的戊肝诊断及防治方法 , 是影响我国 凡民健康的常见传染病之一 近 两年 来,我们开展 了戊 肝病毒基 因组的结构与功能研 究,筛选鉴 定出 HE V 序列 中重要 的抗原表位 , 并对合成l【^=进行丁构 型修饰和化学处理,增加了肽的免疫 反应 性.和J甩这 些合成敞,我们建了新型的 E L I S A 检测抗HEV I R G 和IgM的方法并在临床进行了验证.现将研究结 果报道如材料与方法I肚合成仪 及其试 剂 自动 多肽合 成仪 为美 国ABI 公司产品 ^

3 I A 型HF切割 仪勾口年大 阪 多肽研 究所产 品:BOC 一氯基酸和 侧链 带有 保护基团的 B O C一保护氰 基酸 也购自口年 大舨多肽 研 究所 , 它 们是 : Gl u ( Hc . x ) . Hl B o r n) , Ty r ( B r ― z)・ Cy s(

4 - CH a B z

1 ), Tr p( CHO ) , As p( He o x), S e t ( B z i ) , Th r ( Bz

1 ) , Ar g( To s ) , Ly s( CI ― Z){ P AM一 讨脂 系美 国AB T 公司产品 . 年l 史于

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9 4年12H28日收到 .

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9 5年4H】0日修 回 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 4期 戚 中田等 : 戊 肝病 毒活 性肚 的选择 、 合成 与应 用29l

2 血 清标 本 阳性 参照为Gcnetabs试荆 盘检 测 阳性 的医院临 床送 检血清标_车或 卫生部标准 戊肝血清(暂定) ;

正常血清 取自海市中心血 站的义务 献血 员血清 , HB s Ag 、 AL T 及抗 HCV检 测均 为 阴性 . 急性 非 甲非 乙非l内型( NANB NC) 肝炎患者血清 、 急性 甲肝 血清、乙肝 血清 和丙肝血 清 等分 别采自上 海、江苏、网川和 福 建等 地.3HE V编码蛋白的分 析 与合 成 利用 Ky t e和Do o l i t t l e原理 ] , 通 过计 算机 对HE V 编码蛋白各 区域进 行亲 琉水 性分 析;