PDF《0卷第4期》

井利用 Ga r u i s e r ― Ro b s o n 法和Conform法 , 对编码 蛋 白进 行二级 结构的预 测 .在 此基 础上 , 根据Me r i f i c l d的固相台成肽原理, 选择井合成 了HEV结构区和非结构区的肽段 . d 台 成肚的 包被 及封 闭 抗原 包 被缓 冲液 为0.05too l , L( p H9 '

6 ) 碳酸盐缓 冲液 .合成肽用包 被液 稀释 至3~g/m1 . 加入 聚苯乙烯条 捧孔

1 0 0t t g / 孔,37℃放置 2小时 后弃 去包 被液 . 每孔加200i含2.5%BSA( 第 5组 份)的封闭液 ,

3 7 ℃放置

2 小时 , 用洗涤液洗

2 遍,干燥后真空封装 .

4 C贮存供问接 E L I S A法检测抗 H E V用.

5 抗HE V EL I SA检舅在合成肽包 被 的条 排孔 中每 孔加 稀释后样品 I

1 0 I ( 稀释 液1001.待检血清10¨1)・37℃温 育45分 钟后 洗涤 5遍;

再加酶标 羊抗 凡 Y链 或 链抗 体100

1 .

3 7 ℃温育

4 5分钟.洗涤

5 遍后用OpD(

1 0

0 1 ) 显色.37℃反应

1 5分钟 后甩2m o l / LH: S O 终止 . 在酶 标仪 r 卜{勇I定492rim吸光 度∞D忾) , 参考波长

6 5

3 n m 结果1HE V 编 码蛋 白的疏水性及二级结构分析对HE V 非结构区(OR F ) 及结构区(OR F : 和OR F

3 ) 编码蛋白进行疏水性分析及二级结构预测,发现HEV 的抗 原表位尽管有沿 其氨 基酸序列全长分布的倾向.但某些区段的抗原性 仍较明显.故选择亲水性高、含有目一转角及日一折叠的区域 , 在 3个 开读框架内共 合成了7个 肽段再根据各l f

6 = 与戊肝血清的免疫反应性 ( 结果l末列 出),选出了EH(OR F ) 、 E H ( O RF ) 和EH(ORF

3 ) 三段肽(图】).HE V 台 成肽 的纯化与鉴定从树脂 酸解离 F 来 的合成肽 , 经裂解 、 去保 护基 团、SephadexGl5脱盐 及TS K

4 0 ( f ) 分离后.再过高压液相Cs反相 层析柱纯 化,从而得到 HP L C纯(单一峰)的目的 酞(罔2).氨基酸组成分析证明各肽的氡 基酸组成均 符 合理 论值(以EH为例,见表

1 ) . 表tHEV台或肽 ( E I d

1 ~ D的 铽基酸组成 分析 Ta b i c 】 Am i no Ac i d Co mp o s i t i o n Sy n t hc t i ~HEV Pe p t i d e EH l T 维普资讯 http://www.cqvip.com

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3 戊肝肽与参照血 { 膏的反 应性 利 用合 成、筛选的三 段肽(EHⅢ、 E Hm和EH2)分别 检 测卫 生 部的 HE V 参 照血 清(暂定) , 由表........