PDF《技术手册》

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网址:www.promega.com.cn 第4页,共13 页 上海普洛麦格生物产品有限公司 RNA 分离纯化流程图 ? 加入稀释液,用移液枪混匀. ? 动物组织、植物组织混匀后直接以最大速度离心

5 分钟. ? 细胞混匀后以 300-500xg(1100-1500)rpm 离心

5 分钟. ? 细菌裂解物混匀后不要离心. ? 离心后的动植物、细胞上清液中加入 0.5 倍上清体积的无水乙醇,混匀. ? 细菌裂解物中直接加入 300μl 无水乙醇,混匀. ? 混合液转移至离心柱,12000-14000xg 离心

1 分钟,弃滤液. ? 加入 600?l RNA 洗液洗涤,12000-14000xg 离心

45 秒,弃滤液. ? 加入 50?l DNA 酶I孵育液孵育

15 分钟. ? 然后加入 600?lRNA 洗液,12000-14000xg 离心

45 秒,弃滤液. ? 加入 600?l 洗液,,

12000-14000xg 离心

45 秒,弃滤液. ? 将离心柱重新安置于收集管上,12000-14000xg 离心2分钟. ? 将离心柱安放在洗脱管上,加入 50-200?l 无核酸酶水,12000-14000xg 离心

1 分钟,收集的 RNA 保存于-70℃. ? 处理好的样品加入 RNA 裂解液,颠倒离心管 3-4 次,混匀. . 订购电话及技术支持请联系:普洛麦格(北京)生物技术有限公司

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网址:www.promega.com.cn 第5页,共13 页 上海普洛麦格生物产品有限公司 ? 从动物组织中提取 RNA 准备下列材料: ? 小型组织匀浆器或碾钵及液氮(如,Brinkmann, Tissuemizer? 或Omini Micro homogenizer) ? 无水乙醇 ? 小型离心机 操作方法

1、裂解物的制备 按照以下两种方法进行裂解物的制备: ① 必须使用新鲜或超低温冻存的组织.迅速将组织放入无核酸酶的 1.5ml EP 管或 匀浆管中,按起始量加入 RNA 裂解液(裂解液加入量见表 1) ,置冰浴中,用 组织匀浆器破碎细胞. ② 必须使用新鲜或超低温冻存的组织.迅速将组织投入到已加入液氮的碾钵中........