PDF《表达轮状病毒 G2 和G3 型vp7 基因重组腺病毒的免疫效果 3》

6 小鼠脾淋巴细胞分泌 IL24 和IFN

2 γ含量的测 定 无菌操作摘取小鼠脾脏 ,制备脾淋巴细胞悬液 , 用1640 完全培养液调细胞数至

1 *106 细胞/ mL , 加入

96 孔U型细胞培养板 ,每孔

100 μL ,做3个复 孔 ,每孔再加入

100 μL 含有 ConA 的1640 培养液 (ConA 终浓度为

5 μg/ mL) .CO2 培养箱内

37 ℃ 培养24h 后 ,每孔无菌吸出

100 μl 培养液 ,2 000r/ min 离心 10min ,收集上清用于 IL24 的测定 ;

细胞继续 培养至 72h ,同样方法收集上清用于 IFN2 γ测定. IL24 和IFN2 γ的测定按试剂盒说明书进行. 1.

7 中和试验 在MA104 细胞上进行 ,具体方法参见文献[12] .

2 结果 2.

1 重组腺病毒免疫小鼠后可诱导产生 RV 特异 性血清抗体 以免疫 Ad5 组的小鼠血清为阴性对照 ,将重组 腺病毒 rvAdG2VP7 和rvAdG3VP7 免疫的小鼠血 清进行

1 000 倍稀释后 ,对其抗 RV G2 或G3 型VP7 抗体的产生情况进行了检测 ,表明重组腺病毒 可有效诱导针对 G

2、 G3 型RV 的IgG抗体 ,结果见 图

1、 图2.

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3 张彩红 ,等 :表达轮状病毒 G2 和G3 型vp7 基因重组腺病毒的免疫效果 ? 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 图1重组腺病毒免疫后小鼠血清 IgG抗体的阳转率 Fig.

1 Seroconversion rates of rotavirus specific Ig G in mice immunized with different recombinant adeno2 viruses G2 : Immunized with rvAdG2VP7 ;

G3 : Immunized with rvAd G3VP7 ;

in : intranasal ;

is : oral 图2重组腺病毒免疫后小鼠血清 IgA 抗体的阳转率 Fig.

2 Seroconversion rates of rotavirus specific IgA in mice immunized with different recombinant adeno2 viruses G2 : Immunized with rvAdG2VP7 ;

G3 : Immunized with rvAdG3VP7 ;

in : intranasal ;

is : oral. 2.

2 重组腺病毒免疫小鼠可诱导产生 RV 特异性 黏膜免疫 由于黏膜免疫在 RV 感染的免疫保护作用中发 挥重要作用 ,因此我们对小鼠肺灌洗液及肺、 肠匀浆 液中的 RV 特异性 IgG 和sIgA 抗体进行了检测. 将上述标本用 PBS 溶液

100 倍稀释后进行测定 ,结 果见图

3 ,图4,表明重组腺病毒可诱导 RV 特异性 黏膜免疫. 2.

3 重组腺病毒免疫小鼠可诱导产生 RV 特异性 血清中和抗体 图3重组腺病毒免疫后小鼠 Ig G抗体的阳转率 Fig.

3 Positive rates of rotavirus specific IgG in mice inoc2 ulated with different recombinant adenoviruses Note :Li ,Lung lavage ;

Lhf ,Lung homogenate fluid ;

Inf ,Intestine ho2 mogenate fluid. G2 , Immunized with rvAdG2VP7 ;

G3 , Immunized with rvAdG3VP7 ;

in ,intranasal ;

is ,oral. 图4重组腺病毒免疫后小鼠 sIgA 抗体的阳转率 Fig.

4 Positive rates of rotavirus specific sIgA in mice inoc2 ulated with different recombinant adenoviruses Note : G2 , Immunized with rvAdG2VP7 ;

G3 , Immunized with rvAdG3VP7 ;

in ,intranasal ;

is ,oral. Li ,Lung lavage ;

Lhf ,Lung ho2 mogenate fluid ;

Inf ,Intestine homogenate fluid. 根据血清抗体检测结果 ,我们从不同免疫组中 分别取一支抗体阳性血清 ,检测其对不同 RV 毒株 的中和活性.结果表明 ,经过

3 次免疫后免疫组小 鼠血清均能产生较高滴度的中和抗体 (表1) ,在细 胞培养上可阻止同型 RV 感染 ,但对异型病毒感染 没有阻断作用 ,这与预期结果相符 ,也证实了多价疫 苗的必要性.滴鼻组和灌胃组小鼠血清针对鼠 RV 的中和抗体滴度没有明显区别. 表1重组腺病毒免疫小鼠诱导的轮状病毒血清中和抗体 分析 Table