PDF《线粒体的热机效率原理及其在运动疲劳中的应用》

2 , 对NADH 底物为 1/ 3.因此 , 上述表达式的最终结果应当是 E = f *( P/ O) . 如果呼吸链电子漏水平增高 , 其做无用功的比例偏大 , 结果将是线粒体合成 A TP 效率的降低 , 表现为 P/ O 比值的下降. Fig.

1 Two pathways of electron transfer of mitochondrial respiratory chain. The electrons transferred inside of the chain are coupled with A TP synthesis. The electrons leaking out of the chain are linked to the metabolism of O2 ・

649 第4期本文以小鼠游泳耗竭为运动模型 ,从呼吸链电子漏的角度探讨了线粒体合成 A TP 的工作 效率 , 并探讨了呼吸链电子漏与运动疲劳的相关性 , 得到了认识运动疲劳分子机制的某些启 示.

1 材料和方法 1.

1 材料和试剂 脱脂牛血清白蛋白 (Defatted BSA) , 抗坏血酸 (L - Ascorbatic Acid) , 鱼藤 酮(Rotenone) , 抗霉素 A (Antimycin A) ,

1 ,

1 ,

3 ,

3 - 四乙氧基丙烷 ( Tetraethoxy propane , TEP) , NADH , Scopoletin 为Sigma 产品 ;

ADP , MOPS 为ICN 产品 ;

N ,N ,N'

,N'

- 四甲基对苯二胺 ( TM PD) 为BDH 公司产品 ;

琥铂酸钠为 Aldrich 公司产品 ;

Q0 C10 H2 (还原 型) 为本实验室合成 ;

辣根过氧化物酶 ( Horseradish Peroxidase , HRP) , 硫代巴比妥酸 ( Thiobarbituric acid , TBA) , 十二烷基磺酸钠(SDS) 及其它试剂均为国产分析纯. 1.

2 动物分组和运动模型 20g~25g 雄性中国昆明种小白鼠(中科院遗传所动物饲养场提供) ,随机分为对照组和耗 竭游泳组 , 实验前 12h 均禁食 ,自由饮水. 耗竭游泳组小鼠在水池中无负重游泳至耗竭 , 水温 25~30 ℃,以动物下沉后

10 秒不能上浮为耗竭判断标准 , 然后迅速取出 , 断头取材. 1.

3 心肌线粒体的分离及蛋白质定量方法 心肌线粒体分离采用常规差速离心法 , 但稍加改进.心肌组织加匀浆液在冰浴中剪成碎 片,匀浆液含 0.

225 mol/ L Mannitol , 0.

075 mol/ L Sucrose ,

1 mmol/ L ED TA , 0.

05 mol/ L Tris p H 7.

4 , BSA 0.

1 % (w/ v) ;

加十倍体积匀浆液.在2℃用低温高速离心机离 心,制成线粒体悬浮液.整个过程在 0~4 ℃ 进行.蛋白质测定采用双缩脲法. 1.

4 线粒体抗氰呼吸的测定 [4] 鉴于 KCN 只抑制链内电子传递所引起的氧耗 , 而不抑制电子漏引起的氧耗 , 因此可通过 检验线粒体四态呼吸对 KCN 的敏感性 ,来显示呼吸链电子漏的大小. 1.

5 线粒体脂质过氧化产物 MDA 的测定 采用 Ohkawa TBA 反应法 [........