PDF《ASO 使用说明书》

v2 : 1X riboFECT? CP Buffer;

v3 : 20μM ASO;

v4 : riboFECT? CP Reagent siRNA 终浓度 每孔体积 培养基(v1) Buffer(v2) ASO(v3) Reagent(v4) 96-well 100nM 100μl 92.90μl 6μl 0.5μl 0.6μl 50nM 100μl 93.15μl 6μl 0.25μl 0.6μl 30nM 100μl 93.25μl 6μl 0.15μl 0.6μl 20nM 100μl 93.30μl 6μl 0.1μl 0.6μl 10nM 100μl 93.35μl 6μl 0.05μl 0.6μl 24-well 100nM 500μl 464.50μl 30μl 2.5μl 3μl * 50nM 500μl 465.75μl 30μl 1.25μl 3μl 30nM 500μl 466.25μl 30μl 0.75μl 3μl 20nM 500μl 466.50μl 30μl 0.5μl 3μl 10nM 500μl 466.75μl 30μl 0.25μl 3μl 12-well 100nM 1ml 929.00μl 60μl 5μl 6μl 50nM 1ml 931.50μl 60μl 2.5μl 6μl 30nM 1ml 932.50μl 60μl 1.5μl 6μl 20nM 1ml 933.00μl 60μl 1μl 6μl 10nM 1ml 933.50μl 60μl 0.5μl 6μl 6-well 100nM 2ml 1858.00μl 120μl 10μl 12μl 50nM 2ml 1863.00μl 120μl 5μl 12μl 30nM 2ml 1865.00μl 120μl 3μl 12μl 20nM 2ml 1866.00μl 120μl 2μl 12μl 10nM 2ml 1867.00μl 120μl 1μl 12μl *: 实验参考用量示例, 对于部分细胞类型需要进一步优化. 3) 效果检测 转染完成后 24~72 小时均可进行 ASO 沉默效果检测,最佳检测时间不细胞类型,转染试 剂,检测目的等相关. a. RNA 水平的检测:ASO 作用的目标分子是目的基因的 RNA,其涉及 RNase-H 介导的靶 RNA 裂解 ,故检测目的基因的 RNA 水平可直接反应 ASO 是否Щ恿讼嘤Φ淖饔,且通 过qRT-PCR 可计算具体的抑制效率.一般 ASO 转染后 24~72h 即可检测到目的基因 RNA 表达明显降低.注:引物设计质量很重要 . b. 蛋白水平的检测:对于蛋白编码基因,还需检测相应的蛋白表达水平,以确定是否目的蛋 白也成功下调.由于蛋白表达水平的变化受多个因素影响,有时候会出现 RNA 水平成功 抑制了而蛋白水平变化丌明显的情况.若蛋白表达水平下降丌明显,需认真检测其 mRNA 的表达水平,用于判断 ASO 丌理想的原因. c. 功能筛选:应用 EdU 细胞增殖、TUNEL 细胞凋亡等检测方法进行 ASO 对细胞功能的直 接筛选. 电话咨询:

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邮箱:[email protected] 动物实验方法 动物模型:根据实验需要选择合适的动物模型. 修饰方式:锐博生物经过多年研,开出了 PS、 2'OMe 修饰方案修饰的 ASO,可直接用于 动物实验. 给药方式:局部给药,最直接的导入方式局部给药,ASO 的导入效率较高, 用量少,ASO 能 很快被吸收.适用于浅表器官和组织,包括眼、肌肉、皮下组织等. 系统给药:一些无法通过局部给药方式到达的靶位,如内脏,器官以及一些散列分布的靶位 (如淋巴细胞、转移性肿瘤细胞等),可使用系统性注射方式,包括心、肝、脾、肺、肾等. 相关产品 产品编号 产品名称 C10511-05 riboFECTTM CP Transfection Kit(166T) C10511-1 riboFECTTM CP Transfection Kit(333T) C10410-1 riboMONITORTM Transfection Indicator Kit(Green),20T