PDF《烟嘧磺隆降解菌枯草芽孢杆菌 YB1 颗粒剂的 加工及应用》

10 mg/kg 时,添加降解 菌N80 的处理,小白菜等的出苗率分别比未添加 降解菌 N80的处理提高 26%~43%. YB1 菌株是杨亚君等从农药厂污水中分离筛 选得到的一株枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis,其可 在5d内将

2 mg/L 的烟嘧磺隆降解 86.2%[9] .已有 研究表明,YB1 对烟嘧磺隆的降解主要是通过分 泌胞外酶来实现的[10-12] .为此,笔者将 YB1 菌株 进行固体发酵,同时考虑到微生物颗粒剂具有易 加工、且操作方便等优点,通过对菌株载体和保 护剂种类的筛选,将YB1 发酵产物加工成颗粒 剂,并测定其特性.通过室内盆栽法,以小麦为 敏感指示植物,研究了 YB1 颗粒剂对土壤中烟嘧 磺隆的降解效果,旨在为解决烟嘧磺隆残留地区 的土壤修复问题提供参考.

1 材料与方法 1.1 供试材料 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis YB1 菌株 (由河 北农业大学植物保护学院农药系实验室筛选获得 并保存).活菌计数板 (北京维欣仪奥科技发展有 限公司);

Nikon ECLIPSE E100 显微镜 (日本 Nikon 公司);

湿法制粒机 KCB-80(北京开创同和 科技发展有限公司).麦麸、秸秆粉碎后过孔径为 0.18 mm 的样品筛.供试植物:大白菜、小白 菜、小麦、油菜和生菜 (购自保定市农资市场). 载体:白炭黑 (焦作市科邦精细材料有限公司)、 膨润土、活性白土和硅藻土 (淄川区天华澎润土加 工厂);

保护剂:酪氨酸、羧甲基纤维素钠、腐殖 酸 (北京索莱宝科技有限公司). 1.2 试验方法 1.2.1 YB1 菌株载体和保护剂筛选 分别以秸秆 粉、膨润土、白炭黑、活性白土和硅藻土作为载 体,经高压蒸汽

121 ℃(1.51 *

107 Pa) 灭菌

20 min 后以 5% 的质量分数分别与 LB 固体培养基混合制 备平板.取YB1 斜面保存的菌种,用无菌水冲洗 稀释,制备成活菌含量为

103 CFU/mL 的菌悬液. 取0.1 mL 菌悬液涂板,于30 ℃ 培养

48 h 后观察 单菌落数目. 分别以酪氨酸、羧甲基纤维素钠和腐殖酸为 保护剂,于培养皿 (无盖) 中加入

10 mL 活菌含量 为103 CFU/mL 的YB1 菌悬液,添加保护剂的质 量分数分别为 1% 和3%.于紫外灯下

30 cm(垂直 距离) 处照射

20 min 后立即涂 LB 平板,于30 ℃ 避光培养

48 h 后计算单菌落数目.分别以不添加 保护剂经紫外灯照射和不经紫外灯照射的处理为 对照.每处理

3 次重复. 1.2.2 YB1 颗粒剂加工与生物特性检测 将枯草 芽孢杆菌 YB1 菌株接种于新鲜的 LB 液体培养基 中,于30 ℃、150 r/min 摇床中培养

24 h 制备种 子液 (活菌数约为

1 *

108 CFU/mL) 备用.按照前 期已优化的发酵条件进行发酵:麦麸与秸秆质量 比为

5 : 5,氮源为氯化铵,接种量为

1 *

107 CFU/g, 培养基固液比为

1 :

2、于30 ℃ 下培养

7 d 后得到 固体发酵产物,统计 YB1 活菌数. 将YB1 固体发酵产物与筛选后的载体按质量 比1:1 混合,加入质量分数为 3% 的保护剂和 5% 的淀粉进行挤压造粒,得到枯草芽孢杆菌 YB1 颗 粒剂.按文献方法[13] 测定 YB1 颗粒剂的生物特 性,包括有效活菌数与杂菌数、含水量及 pH 值等. 1.2.3 YB1 颗粒剂对土壤中烟嘧磺隆降解效果的 测定 采用室内盆栽法[14] 测定不同供试植物对烟 嘧磺隆的敏感性.将提前催芽露白的供试植物分 别播种于含不同质量分数 (

0、0.156

3、0.312

5、 0.

625、1.25 和2.5 mg/kg) 烟嘧磺隆的土壤中,于 室温通风处培养