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第1页共4页北京庄盟国际生物基因科技 北京庄盟国际生物基因科技 北京庄盟国际生物基因科技 北京庄盟国际生物基因科技有限公司 有限公司 有限公司 有限公司 Beijing Zoman Beijing Zoman Beijing Zoman Beijing Zoman B B B Biotechnology iotechnology iotechnology iotechnology CO.

,LT CO.,LT CO.,LT CO.,LTD D D D 关于客户反馈感受态细胞 DH5α生长速度慢/长斑小的问题的说明 随着我公司感受态产品的大量销售 随着我公司感受态产品的大量销售 随着我公司感受态产品的大量销售 随着我公司感受态产品的大量销售, , , ,有有有有少数 少数 少数 少数客户反馈感受态细胞 客户反馈感受态细胞 客户反馈感受态细胞 客户反馈感受态细胞 DH5 DH5 DH5 DH5 α α α α生长速度慢 生长速度慢 生长速度慢 生长速度慢/ / / /长斑小的问题 长斑小的问题 长斑小的问题 长斑小的问题. . . .通过与客户沟通和大量实验证明 通过与客户沟通和大量实验证明 通过与客户沟通和大量实验证明 通过与客户沟通和大量实验证明: : : :感受态细 感受态细 感受态细 感受态细 胞胞胞胞DH5 DH5 DH5 DH5α α α α生长速度慢 生长速度慢 生长速度慢 生长速度慢/ / / /长斑小 长斑小 长斑小 长斑小是由于 是由于 是由于 是由于长斑数太多 长斑数太多 长斑数太多 长斑数太多引起 引起 引起 引起, , , ,并非感受态细胞质量 并非感受态细胞质量 并非感受态细胞质量 并非感受态细胞质量 问题 问题 问题 问题. . . . 现象 现象 现象 现象: : : :菌斑小 小小小, , , ,多多多多, , , ,密密密密. . . . 原因 原因 原因 原因: : : :我公司感受态细胞转化效率高, 获得的转化细菌多,如果涂板 菌液太多,则菌斑太密, 细胞营养不良,生长缓慢,导致菌斑偏小. 我公司的 DH5 DH5 DH5 DH5α α α α感受态 感受态 感受态 感受态, , , ,每一批次都 每一批次都 每一批次都 每一批次都有完善的质量检测 有完善的质量检测 有完善的质量检测 有完善的质量检测, , , ,必须达到 必须达到 必须达到 必须达到

8 8

8 8* * * *10

10 10

108 8

8 8 以上的转化效率.我们将感受态转化效率降低到

10 的7次方,甚至 是10 的6次方,然后按照客户的方式全部涂板, 则平板上的菌斑数目适中, 细胞生长速度快,菌斑体积变大;

如果我们还是使用公司的正常产品,但减 少涂布量,如涂布 20-100ul 等,也能达到实现上述目的. 结论 结论 结论 结论: : : : 菌斑 菌斑 菌斑 菌斑大小 大小 大小 大小和生长 和生长 和生长 和生长快慢 快慢 快慢 快慢与 与与与菌 菌菌菌斑 斑斑斑数目 数目 数目 数目成 成成成反比 反比 反比 反比关系 关系 关系 关系 菌菌菌菌斑数 斑数 斑数 斑数目 目目目越多 越多 越多 越多, , , ,菌斑生长越慢 菌斑生长越慢 菌斑生长越慢 菌斑生长越慢, , , ,体积越小 体积越小 体积越小 体积越小. . . . 建议长斑数 建议长斑数 建议长斑数 建议长斑数: : : :控制在

1000 个以内为最佳,超过

10000 个则严重影响 细胞生长. 具体操作方法 具体操作方法 具体操作方法 具体操作方法: : : :建议转化时取部分菌液涂板,剩余菌液置于 4℃保存, 第二天观察长斑情况,若长斑太少可增加涂板量;

若长斑太多则适当减少 涂板量. 总的来说,涂布量的多少与转化子的多少有直接关系.而转化子的多 少,就质粒而言,与质粒的大小、多少及纯度都有关系.对于连接产物则 比较复杂了,转化子数目与载体、连接酶、片段大小及其浓度和纯度等因 素相关,推荐按载体使用说明书操作. 第2页共4页北京庄盟国际生物基因科技 北京庄盟国际生物基因科技 北京庄盟国际生物基因科技 北京庄盟国际生物基因科技有限公司 有限公司 有限公司 有限公司 Beijing Zoman Beijing Zoman Beijing Zoman Beijing Zoman B B B Biotechnology iotechnology iotechnology iotechnology CO.,LT CO.,LT CO.,LT CO.,LTD D D D 实验结果如下 实验结果如下 实验结果如下 实验结果如下: : : :37℃ ℃ ℃ ℃过夜培养 过夜培养 过夜培养 过夜培养( ( ( (19:00-8:00;