PDF《重组及表达》

第29卷第4期2008年8月西安交通大学学报(医学版)Journal of Xiπan Jiaotong U niversity (Medical Sciences) Vol.

29 No.

4 Aug.

2008 T 细胞 CTLA24 、 TCRV β

8 基因克隆、 重组及表达 王晶1 ,朱江2 ,朱本章1 ,马卫国3 (1. 西安交通大学医学院第一附属医院内分泌科 ,陕西西安

710061 ;

2. 陕西省第三人民医院 ,陕西西安

710061 ;

3. 西安医学院附属医院 ,陕西西安 710077) 摘要 :目的 克隆 Gravesπ病患者甲状腺组织 T 淋巴细胞的 CTLA24 胞外段和 TCRV β

8 目的基因 ,重组为 CTLA242 TCRV β

8 基因并表达出融合蛋白.方法 RT2PCR 从Gravesπ病患者甲状腺组织中克隆 T 淋巴细胞的 CTLA24 胞外 段和 TCRV β

8 基因 ,依次与表达质粒进行连接 ,双酶切及测序鉴定获得正确的重组子 ;

原核表达融合蛋白 ,SDS2PA GE 及Western2Blotting 检测蛋白表达情况.结果 基因克隆扩增出 CTLA24 和TCRV β

8 目的基因片段 ,测序结果证实 序列与已发表的一致.重组基因原核表达出与预期分子质量大小相符的目的蛋白.结论 成功构建和表达了 CT2 LA24 - TCRV β

8 基因 ,为探索 Gravesπ病免疫耐受治疗提供了基因产品. 关键词 : Gravesπ病;

CTLA24 ;

TCRV β;

基因表达 ;

融合蛋白 中图分类号 :R581.

1 文献标识码 :A 文章编号 :167128259 (2008)

0420404205 Gene clone , recombination and expression of CTLA24 , TCRVβ8 of human T lymphocyte Wang Jing1 , Zhu Jiang2 , Zhu Benzhang1 , Ma Weiguo3 (1. Department of Endocrinology , the First Affiliated Hospital , Medical School of Xiπan Jiaotong University , Xiπan

710061 ;

2. the Third Peopleπs Hospital , Xiπan

710061 ;

3. the Affiliated Hospital of Xiπan Medical College , Xiπan

710077 , China) ABSTRACT : Objective To clone CTL A24 and TCRVβ8 gene f rom T lymp hocyte of thyroid of Gravesπ disease ( GD) patients , recombine to f orm CTL A242TCRVβ8 f usion gene and exp ress the f usion p rotein. Methods CTL A24 and TCRVβ8 gene was cloned f rom T lymp hocyte of thyroid of GD patients by R T2PCR. Then it was recombined with exp ression plasmid in order. The correct plasmids were obtained after the restriction analysis and DNA sequencing. Prokaryotic exp ression of the f usion p rotein in E. coli , SDS2PA GE and Western Blotting were used to verif y the f usion p rotein. Results Restriction analysis and DNA sequencing confirmed the correct sequence and insertion site of the recombinant plasmid. The recombinant f usion p rotein was successf ully exp ressed in E. coli , which was consistent with the p redicted putative calculating molecular weight. Conclusion CTL A242 TCRVβ8 gene was constructed and exp ressed successf ully , p roviding gene p roduct and application theory f or immune tolerance therap y of GD. KEY WORDS : Gravesπ disease ( GD) ;

CTL A24;

TCRVβ8 ;

gene exp ression ;

f usion p rotein 收稿日期 :2008201217 修回日期 :2008203205 基金项目 :国家自然科学基金资助项目(No. 30370678) 通讯作者 :朱本章 ,教授. E2mail : benzhang @medmail. com. cn 作者简介 :王晶 (19812) ,女 (汉族) ,硕士 ,医师. 研究方向 :自身免疫 性甲状腺疾病. 现在西安市第四医院内分泌科工作. E2mail : wangj991241 @163. com Gravesπ病( Gravesπ disease , GD) 是一种器官特 异性自身免疫性疾病 ,是甲状腺功能亢进症中最常见 的类型.自身免疫病的 T 细胞活化需要双信号刺 激 ,阻断第一信号则特异性免疫应答不能发生 ,阻断 协同刺激信号 , T 细胞则进入无反应状态或发生凋 亡.细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原